小鼠网状蛋白4(RTN4)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）即酶联免疫吸附测定，是一种常用的免疫分析技术。ELISA 试剂盒则是用于进行 ELISA 检测的一系列相关试剂和材料的组合。

以下是关于小鼠网状蛋白 4（RTN4）酶联免疫试剂盒的详细介绍：

产品货号：DM-X6554

产品规格：【48T/96T】

基本信息产品名称：小鼠网状蛋白 4（RTN4）酶联免疫试剂盒，英文名称为 Mouse RTN4（Reticulon 4）ELISA Kit1。
用途：用于体外定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清及其他生物学样本中网状蛋白 4（RTN4）的浓度。
检测原理：通常采用双抗体夹心法。用抗小鼠 RTN4 抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的小鼠 RTN4 与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠 RTN4 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗小鼠 RTN4 抗体与结合在包被抗体上的小鼠 RTN4 结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分再次被洗去。加入显色底物（TMB），TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处测 OD 值，小鼠 RTN4 浓度与 OD450 值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中小鼠 RTN4 的浓度。

试剂盒组成
预包被酶标板：已包被有抗小鼠 RTN4 抗体的 96 孔或 48 孔微孔板。
标准品：一系列已知浓度的小鼠 RTN4 标准品，用于绘制标准曲线。
标准品稀释液：用于稀释标准品，以获得不同浓度的标准品溶液。
检测试剂 A 和检测试剂 B：通常检测试剂 A 为生物素化的抗小鼠 RTN4 抗体，检测试剂 B 为辣根过氧化物酶标记的亲和素。
稀释液 A 和稀释液 B：分别用于稀释检测试剂 A 和检测试剂 B。
洗涤缓冲液：用于洗涤酶标板，去除未结合的物质。
TMB 底物：与辣根过氧化物酶反应，产生显色反应。
终止液：用于终止显色反应，通常为硫酸溶液。
封板膜：用于密封酶标板，防止水分蒸发和外界杂质污染。

样本要求
血清：全血样品于室温放置 2 小时或 4℃过夜后，于 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原、无内毒素试管。
血浆：抗凝剂推荐使用 EDTA 或肝素，样品采集后 30 分钟内于 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测。
细胞培养上清：取细胞培养上清于 1000×g 离心 20 分钟，除去杂质及细胞碎片，取上清检测。

操作步骤

试剂盒平衡：将试剂盒从冰箱中取出，平衡至室温（20-25℃）。
配置工作液：根据试剂盒说明书，配置洗涤液、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液等。
加样：将标准品和样品加入到酶标板孔中，每孔加入量通常为 100μl，设置复孔，然后将酶标板放入 37℃恒温箱中温育一定时间，如 1 小时1。
洗涤：弃去孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤酶标板，通常洗涤 3-5 次，每次浸泡 1-2 分钟，以去除未结合的物质。
加入检测试剂：加入生物素化的抗小鼠 RTN4 抗体工作液，每孔 100μl，37℃温育 30-60 分钟，然后再次洗涤酶标板。
加入酶结合物：加入辣根过氧化物酶标记的亲和素工作液，每孔 100μl，37℃温育 30-60 分钟，洗涤酶标板。
显色：加入 TMB 显色液，每孔 100μl，避光室温放置 10-30 分钟，观察颜色变化，反应孔中的颜色会逐渐由无色变为蓝色。
终止反应：加入终止液，每孔 50μl，反应颜色由蓝色变为黄色。
读数：用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值，根据标准曲线计算样品中小鼠 RTN4 的浓度。

注意事项

试剂保存：未开封的试剂盒应保存在 2-8℃，避免冻结，有效期内使用。开封后的试剂盒，应在 1 个月内用完，并注意密封保存。
避免污染：操作过程中应使用一次性吸头和试管，避免交叉污染。同时，应保持实验环境的清洁和干燥。
洗涤 ：洗板过程非常重要，不充分的洗板易导致假阳性结果。洗涤时应注意洗涤液的量和浸泡时间，确保孔内液体充分被洗涤。
加样准确：使用高精度移液器加样，确保加样量的准确性和重复性。加样时应避免产生气泡，以免影响检测结果。
显色时间控制：显色时间应根据试剂盒说明书的要求进行控制，过长或过短的显色时间都可能影响检测结果的准确性。
避免强光照射：TMB 底物应避光保存，显色反应过程也应在避光条件下进行，以免影响显色效果。

ELISA试剂盒优势：

1、抗体----高效、灵敏、特异性好

2、规范包被操作----吸附均匀、吸附性好、空白值低、孔底透明度高

3、优化方案----重复性高，可靠性强

4、高标准技术服务要求：灵敏度高，特异性强

5、适用范围广：血浆、血清、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本。

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