小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6533

产品规格：【48T/96T】

以下是小鼠 β 氨基己糖苷酶 A（β -Hex A）酶联免疫试剂盒的详细介绍：

检测原理
采用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。将已知 β -Hex A 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先让 β -Hex A 和生物素标记的抗体同时温育，洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用产生颜色。颜色的深浅和样品中 β -Hex A 的浓度呈比例关系，通过酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度（OD 值），即可根据标准曲线计算出样品中 β -Hex A 的浓度。

试剂盒组成
微孔酶标板：48T 或 96T 的板条，用于进行反应。
标准品：通常为已知浓度的 β -Hex A 溶液，用于绘制标准曲线。
标准品稀释液：用于稀释标准品。
生物素标记的抗体：与 β -Hex A 特异性结合。
亲和链酶素 - HRP：与生物素标记的抗体结合，用于催化底物显色。
样品稀释液：用于稀释样品。
显色剂 A、B：底物，在酶的作用下发生显色反应。
终止液：用于终止显色反应。
浓缩洗涤液：稀释后用于洗涤酶标板。
说明书：包含试剂盒的使用方法、注意事项等详细信息。

样本要求
可检测的样本类型包括血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液等。
血清：室温血液自然凝固 10 - 20 分钟，离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。
血浆：应根据标本的要求选择柠檬酸钠、EDTA、肝素等作为抗凝剂，混合 10 - 20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2 - 7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右，通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

操作步骤
使用前，将所有试剂充分混匀。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。
加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内，立即加入 50ul 的生物素标记的抗体，盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育 1 小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干，重复此操作 3 次。
每孔加入 80ul 的亲和链酶素 - HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30 分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干，重复此操作 3 次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物 A、B 各 50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育 10 分钟，避免光照。
取出酶标板，迅速加入 50ul 终止液，加入终止液后应立即在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

试剂盒性能
灵敏度：最小的检测浓度小于 1 号标准品，敏感度可达 0.1ng/ml。
特异性：不与人其它细胞因子反应，对小鼠 β -Hex A 具有高度特异性。
重复性：板内、板间变异系数均小于 10%。

仪器准备：准备好酶标仪、洗板机（可选）、移液器、吸头、蒸馏水或去离子水等。

ELISA试剂盒操作步骤：
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。

注意事项

本试剂盒仅用于科研实验，严禁用于临床诊断、 或其他非科研用途。使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，熟悉操作步骤和注意事项。

实验过程中，应严格遵守实验室安全操作规程，穿戴好防护服、手套、护目镜等防护用品。试剂盒中的某些试剂可能具有毒性或腐蚀性，如酶标试剂、终止液等，操作时需特别小心，避免接触皮肤、眼睛和口腔。若不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并及时就医。

试剂盒从冰箱取出后，需在室温下充分平衡后再使用，避免因温度差异导致实验误差。不同批次的试剂盒可能存在一定差异，请勿混用不同批次的试剂盒组分，以免影响检测结果的准确性和重复性。

加样过程是实验的关键步骤之一，加样量的准确性和一致性直接影响检测结果。使用移液器时，需定期校准，确保移液体积准确无误。加样过程中，要避免产生气泡，若有气泡，应轻轻弹击微孔板使气泡逸出，以免影响反应结果。

洗涤过程对降低背景干扰、提高检测特异性至关重要。无论是使用洗板机还是手动洗涤，都要确保洗涤充分，每孔液体被完全去除。洗涤液应现用现配，避免使用过期或受污染的洗涤液。

试剂盒选择

评估性能指标：查看试剂盒的说明书，关注灵敏度、特异性、重复性等性能指标。灵敏度反映了试剂盒检测低浓度目标物的能力；特异性体现了试剂盒对目标物的识别准确性，避免与其他类似物质发生交叉反应；重复性则通过多次检测同一样本的结果一致性来评估。

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