小鼠β葡糖苷酶(β-Glu)酶联免疫试剂盒 

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6531

产品规格：【48T/96T】

用途
主要用于科研实验，可体外定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清、尿液、组织样本等中的 β - Glu。
检测原理
通常采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被 β - Glu 抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体，经过温育并洗涤1。用底物 TMB 显色，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 β - Glu 呈正相关，用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品含量。

试剂盒组成
酶标包被板：1 块（48T 或 96T），用纯化的 β - Glu 抗体包被。
标准品：通常为已知浓度的 β - Glu 溶液，如浓度为 64IU/L，0.5ml×1 支。
标准品稀释液：1.5ml×1 瓶，用于稀释标准品。
酶标试剂：含有 HRP 标记的 β - Glu 抗体。
样品稀释液：用于稀释样品。
显色剂 A、B：底物，在酶的作用下发生显色反应。
终止液：3ml×1 瓶，用于终止显色反应。
浓缩洗涤液：20ml×1 瓶，稀释后用于洗涤酶标板。
说明书：包含试剂盒的使用方法、注意事项等详细信息。

样本要求
血清：室温血液自然凝固 10 - 20 分钟，离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。
血浆：使用合适的抗凝剂采集血液，离心分离血浆。
组织样本：需制成匀浆液。
细胞培养上清：直接收集细胞培养上清液。
尿液：新鲜尿液样本。需注意，样本不能含叠氮钠，因为叠氮钠是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

操作步骤
标准品稀释：按照说明书要求在小试管中对标准品进行稀释。
加样：在酶标包被板上的标准品孔准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水按要求倍数稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复多次。
加酶标试剂：每孔加入酶标试剂 50μl，37℃温育 30 分钟。
再次洗涤：操作同前。
显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟。
终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值），测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒性能
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值大于等于 0.9900。
特异性：可同时检测天然或重组的 β - Glu，且与其他相关蛋白无交叉反应。
灵敏度：检测范围为 1IU/L - 35IU/L 的试剂盒，其灵敏度可满足该检测范围要求。
重复性：板内、板间变异系数通常均小于 10%。

仪器准备：准备好酶标仪、洗板机（可选）、移液器、吸头、蒸馏水或去离子水等。

ELISA试剂盒操作步骤：
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

注意事项

本试剂盒仅用于科研实验，严禁用于临床诊断、 或其他非科研用途。使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，熟悉操作步骤和注意事项。

实验过程中，应严格遵守实验室安全操作规程，穿戴好防护服、手套、护目镜等防护用品。试剂盒中的某些试剂可能具有毒性或腐蚀性，如酶标试剂、终止液等，操作时需特别小心，避免接触皮肤、眼睛和口腔。若不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并及时就医。

试剂盒从冰箱取出后，需在室温下充分平衡后再使用，避免因温度差异导致实验误差。不同批次的试剂盒可能存在一定差异，请勿混用不同批次的试剂盒组分，以免影响检测结果的准确性和重复性。

加样过程是实验的关键步骤之一，加样量的准确性和一致性直接影响检测结果。使用移液器时，需定期校准，确保移液体积准确无误。加样过程中，要避免产生气泡，若有气泡，应轻轻弹击微孔板使气泡逸出，以免影响反应结果。

洗涤过程对降低背景干扰、提高检测特异性至关重要。无论是使用洗板机还是手动洗涤，都要确保洗涤充分，每孔液体被完全去除。洗涤液应现用现配，避免使用过期或受污染的洗涤液。

试剂盒选择

评估性能指标：查看试剂盒的说明书，关注灵敏度、特异性、重复性等性能指标。灵敏度反映了试剂盒检测低浓度目标物的能力；特异性体现了试剂盒对目标物的识别准确性，避免与其他类似物质发生交叉反应；重复性则通过多次检测同一样本的结果一致性来评估。

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