小鼠转化生长因子α(TGF-α)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6481

产品规格：【48T/96T】

小鼠转化生长因子 α（TGF -α）酶联免疫试剂盒是用于定量检测小鼠相关样本中 TGF -α 含量的试剂盒，以下是其详细介绍：
基本信息
规格：常见的有 48T 和 96T 两种规格，以满足不同实验规模的需求。
保存条件：一般需在 2 - 8℃保存，具体可参考试剂盒说明书。
检测波长：通常为 450nm，也可能根据底物等因素有所不同。

检测原理
采用双抗体夹心法 ELISA。用纯化的抗小鼠 TGF -α 抗体包被微孔板，制成固相抗体。往包被单抗的微孔中依次加入 TGF -α、HRP 标记的抗 TGF -α 抗体，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过 洗涤后加底物显色。底物在 HRP 酶的催化下发生颜色变化，颜色的深浅和样品中的 TGF -α 呈正相关，用酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中 TGF -α 的浓度。

试剂盒组成
酶标包被板：1 块（96T）或半块（48T），表面预包被有抗小鼠 TGF -α 的抗体。
标准品：通常为冻干品，2 瓶。临用前以样品稀释液稀释至 1ml，浓度为 100ng/ml，然后做系列倍比稀释，可分别稀释成 100ng/ml、50ng/ml、25ng/ml、12.5ng/ml、6.25ng/ml、3.12ng/ml、1.56ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度 0ng/ml。
样品稀释液：1×20ml / 瓶，用于稀释样品和标准品。
检测稀释液 A 和 B：各 1×10ml / 瓶，分别用于稀释检测溶液 A 和检测溶液 B4。
检测溶液 A 和 B：各 1×120ul / 瓶（1:100），临用前分别以检测稀释液 A 和检测稀释液 B 按 1:100 稀释。
底物溶液：1×10ml / 瓶，一般为 TMB 底物，在 HRP 酶作用下显色。
浓洗涤液：1×30ml / 瓶，使用时用蒸馏水稀释 25 倍。
终止液：1×10ml / 瓶，通常为 2N H?SO?，用于终止显色反应。
说明书：1 份，详细介绍试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等。
封板膜：2 片（48T）或 2 片（96T），用于温育过程中密封微孔板。
密封袋：1 个，用于存放试剂盒中的试剂。

操作步骤
准备：试剂盒从冷藏环境中取出后在室温平衡 20 - 30 分钟。取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
加样：设置标准品孔和样本孔。标准品孔各加不同浓度的标准品 100μL；样本孔中加入待测样本 100μL，设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液 100μL，另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液 100μL。
温育与反应：酶标板置 4℃包被过夜。之后进行洗板，吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍，之后将洗涤液注满板孔，浸泡 1 - 2 分钟，间歇摇动，甩去孔内液体后在吸水纸上拍干，重复洗涤 3 - 4 次。阴性对照孔每孔加入 PBS 50μL，样品孔及空白孔每孔加入相应的抗体工作液 50μL，酶标板置 37℃培养箱的湿盒内，孵育 60 分钟。再次洗板，步骤同前。每孔加 HRP - 标记的二抗工作液 100μL，酶标板置 37℃培养箱的湿盒内，孵育 60 分钟。
显色：再次洗板后，每孔加 TMB 显色液 100μL，轻轻混匀 10s，置 37℃暗处反应 15 - 20 分钟。
终止与测定：每孔加 100μL 2mol/L H?SO?终止反应，在规定时间内，用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值，最终测得的 OD 值为 450nm 吸光值减去 630nm 吸光值，以减少光干扰6。通过标准曲线计算样品中 TGF -α 的浓度。

注意事项
试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不同批号的试剂不要混用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B 液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
底物对光敏感，应避免长时间暴露于光下。实验完成后应立即读取 OD 值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

适用范围
适用于小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液等生物样本中 TGF -α 含量的定量测定，仅用于科研实验，不得用于临床诊断。

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。

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