小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6479

产品规格：【48T/96T】

以下是小鼠转铁蛋白受体（TFR/CD71）酶联免疫试剂盒的详细介绍，内容涵盖原理、组成、操作及应用等关键信息：
一、基本信息
产品名称
小鼠转铁蛋白受体（TFR/CD71）酶联免疫吸附测定试剂盒（Mouse Transferrin Receptor/TFR/CD71 ELISA Kit）。

保存条件

试剂盒未开封时，于 2-8℃ 冷藏保存，有效期通常为 6-12 个月（以说明书为准）。
开封后，酶标板需密封防潮，其余试剂按组分保存（部分试剂需分装冻存，避免反复冻融）。

检测范围
通常为 0.156-10 ng/mL（具体范围以试剂盒说明书为准，不同品牌可能略有差异）。

检测波长
主波长：450 nm；
参考波长（校正）：630 nm（可选，用于消除背景干扰）。

二、检测原理
采用 双抗体夹心 ELISA 法：
预包被抗体：酶标板表面预包被抗小鼠 TFR/CD71 的单克隆抗体（捕获抗体）。
样本反应：待检测样本中的 TFR/CD71 与固相抗体结合，形成 “抗体 - 抗原” 复合物。
酶标抗体结合：加入生物素（或 HRP）标记的抗 TFR/CD71 二抗，与抗原结合，形成 “抗体 - 抗原 - 酶标抗体” 夹心结构。
酶催化显色：加入底物（如 TMB），在辣根过氧化物酶（HRP）催化下显色，颜色深浅与样本中 TFR/CD71 浓度呈正相关。
终止与读数：加入终止液（如硫酸）终止反应，用酶标仪测定 OD 值，通过标准曲线计算样本浓度。

三、试剂盒组成
组分48T 规格96T 规格说明
预包被酶标板 1 块（48 孔） 1 块（96 孔） 已包被抗 TFR/CD71 抗体，开封后未用完的板条需用自封袋密封保存。 
标准品 2 支（冻干品） 2 支（冻干品） 浓度通常为 0 ng/mL（空白）、0.312 ng/mL、0.625 ng/mL、1.25 ng/mL、2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL（需按说明书复溶）。 
酶标抗体工作液 600 μL 1200 μL 含 HRP 标记的抗 TFR/CD71 抗体，使用前需平衡至室温。 
显色剂（TMB） 600 μL 1200 μL 避光保存，避免接触氧化剂。 
终止液（2M H?SO?） 500 μL 1000 μL 强腐蚀性，需小心操作。 
浓缩洗涤液（20×） 15 mL 30 mL 用蒸馏水稀释至 1× 后使用，若有结晶需加热溶解。 
样本稀释液 10 mL 20 mL 用于稀释血清 / 血浆等样本（若样本浓度过高）。 
说明书 1 份 1 份 含操作步骤、注意事项、质控标准等。 

四、适用样本类型
血清：需用不含热原和内毒素的试管采集，离心后取上清。
血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，离心获取上清（避免使用 NaN?防腐）。
细胞培养上清：离心去除细胞碎片后检测。
组织匀浆：需用 PBS 缓冲液匀浆，离心取上清（避免反复冻融导致蛋白降解）。

五、操作步骤（以 96T 为例）
试剂准备
试剂盒从冰箱取出后，室温平衡 30 分钟（酶标板、标准品、酶标抗体等）。
浓缩洗涤液按 1:20 用蒸馏水稀释（如 1 mL 浓缩液 + 19 mL 水），混匀备用。
加样与温育
标准品孔：每孔加入不同浓度的标准品 100 μL，设 3 复孔。
样本孔：每孔加入稀释后的样本 100 μL（若样本浓度高，需用样本稀释液预稀释）。
空白孔：加入蒸馏水 100 μL（不加任何试剂，用于调零）。
封板膜覆盖，37℃温育 30 分钟。
洗板
弃去孔内液体，用 1× 洗涤液注满各孔，静置 30 秒后甩干，重复 5 次， 在吸水纸上拍干。
加酶标抗体
每孔加入酶标抗体工作液 100 μL，封板后 37℃温育 30 分钟。
二次洗板
重复步骤 3 的洗板操作（确保去除未结合的酶标抗体）。
显色
每孔加入显色剂 TMB 100 μL，避光室温（20-25℃）反应 10-15 分钟（蓝色逐渐加深）。
终止与读数
每孔加入终止液 50 μL（颜色由蓝变黄），15 分钟内用酶标仪读取 450 nm 处 OD 值。
结果计算
以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线（建议用四参数拟合）。
根据样本 OD 值从标准曲线中计算实测浓度，再乘以样本稀释倍数（若有预稀释）。

六、注意事项
实验安全
终止液为强酸，避免接触皮肤和黏膜，操作需戴手套和护目镜。
所有废弃物需按生物危害品处理（如含样本的液体需高压灭菌）。
试剂管理
不同批号试剂盒的组分不可混用，避免交叉污染。
酶标抗体和显色剂需避光保存，避免反复冻融。

操作细节
加样时避免枪头接触孔内液体，防止交叉污染；建议使用多通道移液器提高效率。
温育时需用封板膜密封，避免孔内液体挥发。
洗板需 ，若残留杂质会导致背景值偏高（可选择自动洗板机）。

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。

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