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产地 | 上海 |
保存条件 | 2-8° |
品牌 | DUMABIO |
货号 | DM-X6479 |
用途 | 科研实验 |
检测方法 | |
保质期 | 6个月 |
适应物种 | |
检测限 | |
数量 | 999 |
包装规格 | 48/96T |
标记物 | |
样本 | |
应用 | |
是否进口 | 否 |
小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)酶联免疫试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
产品货号:DM-X6479
产品规格:【48T/96T】
以下是小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)酶联免疫试剂盒的详细介绍,内容涵盖原理、组成、操作及应用等关键信息:
一、基本信息
产品名称
小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)酶联免疫吸附测定试剂盒(Mouse Transferrin Receptor/TFR/CD71 ELISA Kit)。
保存条件
试剂盒未开封时,于 2-8℃ 冷藏保存,有效期通常为 6-12 个月(以说明书为准)。
开封后,酶标板需密封防潮,其余试剂按组分保存(部分试剂需分装冻存,避免反复冻融)。
检测范围
通常为 0.156-10 ng/mL(具体范围以试剂盒说明书为准,不同品牌可能略有差异)。
检测波长
主波长:450 nm;
参考波长(校正):630 nm(可选,用于消除背景干扰)。
二、检测原理
采用 双抗体夹心 ELISA 法:
预包被抗体:酶标板表面预包被抗小鼠 TFR/CD71 的单克隆抗体(捕获抗体)。
样本反应:待检测样本中的 TFR/CD71 与固相抗体结合,形成 “抗体 - 抗原” 复合物。
酶标抗体结合:加入生物素(或 HRP)标记的抗 TFR/CD71 二抗,与抗原结合,形成 “抗体 - 抗原 - 酶标抗体” 夹心结构。
酶催化显色:加入底物(如 TMB),在辣根过氧化物酶(HRP)催化下显色,颜色深浅与样本中 TFR/CD71 浓度呈正相关。
终止与读数:加入终止液(如硫酸)终止反应,用酶标仪测定 OD 值,通过标准曲线计算样本浓度。
三、试剂盒组成
组分48T 规格96T 规格说明
预包被酶标板 1 块(48 孔) 1 块(96 孔) 已包被抗 TFR/CD71 抗体,开封后未用完的板条需用自封袋密封保存。
标准品 2 支(冻干品) 2 支(冻干品) 浓度通常为 0 ng/mL(空白)、0.312 ng/mL、0.625 ng/mL、1.25 ng/mL、2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL(需按说明书复溶)。
酶标抗体工作液 600 μL 1200 μL 含 HRP 标记的抗 TFR/CD71 抗体,使用前需平衡至室温。
显色剂(TMB) 600 μL 1200 μL 避光保存,避免接触氧化剂。
终止液(2M H?SO?) 500 μL 1000 μL 强腐蚀性,需小心操作。
浓缩洗涤液(20×) 15 mL 30 mL 用蒸馏水稀释至 1× 后使用,若有结晶需加热溶解。
样本稀释液 10 mL 20 mL 用于稀释血清 / 血浆等样本(若样本浓度过高)。
说明书 1 份 1 份 含操作步骤、注意事项、质控标准等。
四、适用样本类型
血清:需用不含热原和内毒素的试管采集,离心后取上清。
血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,离心获取上清(避免使用 NaN?防腐)。
细胞培养上清:离心去除细胞碎片后检测。
组织匀浆:需用 PBS 缓冲液匀浆,离心取上清(避免反复冻融导致蛋白降解)。
五、操作步骤(以 96T 为例)
试剂准备
试剂盒从冰箱取出后,室温平衡 30 分钟(酶标板、标准品、酶标抗体等)。
浓缩洗涤液按 1:20 用蒸馏水稀释(如 1 mL 浓缩液 + 19 mL 水),混匀备用。
加样与温育
标准品孔:每孔加入不同浓度的标准品 100 μL,设 3 复孔。
样本孔:每孔加入稀释后的样本 100 μL(若样本浓度高,需用样本稀释液预稀释)。
空白孔:加入蒸馏水 100 μL(不加任何试剂,用于调零)。
封板膜覆盖,37℃温育 30 分钟。
洗板
弃去孔内液体,用 1× 洗涤液注满各孔,静置 30 秒后甩干,重复 5 次, 在吸水纸上拍干。
加酶标抗体
每孔加入酶标抗体工作液 100 μL,封板后 37℃温育 30 分钟。
二次洗板
重复步骤 3 的洗板操作(确保去除未结合的酶标抗体)。
显色
每孔加入显色剂 TMB 100 μL,避光室温(20-25℃)反应 10-15 分钟(蓝色逐渐加深)。
终止与读数
每孔加入终止液 50 μL(颜色由蓝变黄),15 分钟内用酶标仪读取 450 nm 处 OD 值。
结果计算
以标准品浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,绘制标准曲线(建议用四参数拟合)。
根据样本 OD 值从标准曲线中计算实测浓度,再乘以样本稀释倍数(若有预稀释)。
六、注意事项
实验安全
终止液为强酸,避免接触皮肤和黏膜,操作需戴手套和护目镜。
所有废弃物需按生物危害品处理(如含样本的液体需高压灭菌)。
试剂管理
不同批号试剂盒的组分不可混用,避免交叉污染。
酶标抗体和显色剂需避光保存,避免反复冻融。
操作细节
加样时避免枪头接触孔内液体,防止交叉污染;建议使用多通道移液器提高效率。
温育时需用封板膜密封,避免孔内液体挥发。
洗板需 ,若残留杂质会导致背景值偏高(可选择自动洗板机)。
结果分析
绘制标准曲线:以标准品浓度为横坐标,对应的吸光度值为纵坐标,在坐标纸上绘制标准曲线,或使用软件(如 Excel、GraphPad Prism 等)进行线性回归分析,得到标准曲线方程。
上海笃玛生物科技有限公司