小鼠转铁蛋白受体蛋白2(TFR2)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6478

产品规格：【48T/96T】

以下是关于 小鼠转铁蛋白受体蛋白 2（TFR2）酶联免疫试剂盒 的详细介绍，内容涵盖基本信息、原理、组成、操作流程、注意事项等关键内容：
一、基本信息
1. 试剂盒用途
检测对象：小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其他生物样本中 转铁蛋白受体蛋白 2（TFR2） 的含量。

2. 检测原理
方法：采用 双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
原理：
试剂盒中预包被抗小鼠 TFR2 的单克隆抗体（捕获抗体）于微孔板表面。待样本中的 TFR2 与固相抗体结合后，加入生物素标记的检测抗体，形成 “固相抗体 - TFR2 - 生物素化抗体” 复合物。随后加入链霉亲和素 - HRP（辣根过氧化物酶），通过生物素 - 链霉亲和素系统放大信号。 加入底物（如 TMB），在酶催化下显色，颜色深浅与样本中 TFR2 含量呈正相关，通过酶标仪测定吸光度（OD 值）计算浓度。

二、试剂盒组成

三、操作流程（简要步骤）
试剂准备：
标准品复溶：按说明书加入指定体积蒸馏水，静置 10 分钟，涡旋混匀。
洗涤缓冲液稀释：20× 洗涤液用蒸馏水稀释为 1×（如 10mL 20× 液 + 190mL 水）。
检测抗体工作液和 HRP - 链霉亲和素工作液：按比例稀释（通常已预混，可直接使用）。
加样：
标准品：按梯度加入微孔板（如每孔 100μL），设复孔。
样本：血清 / 血浆需稀释（按说明书推荐比例，如 1:10 或 1:100），每孔加 100μL，设复孔。
空白对照：加蒸馏水或零标准品（通常为 孔）。
温育：
封板后，37℃孵育指定时间（如 60 分钟）。
洗涤：
弃去孔内液体，用 1× 洗涤液注满微孔，静置 30 秒后甩干，重复 3-5 次， 拍干。
加检测抗体工作液：
每孔加 100μL，37℃孵育 30-60 分钟，洗涤同上。
加 HRP - 链霉亲和素工作液：
每孔加 100μL，37℃孵育 30-60 分钟，洗涤同上。
显色：
每孔加 100μL 底物缓冲液（TMB），避光室温孵育 10-20 分钟（颜色变蓝）。
终止反应：
每孔加 50μL 终止液（硫酸），溶液由蓝变黄，立即测定 OD 值。
数据分析：
以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线（通常为对数曲线）。
根据样本 OD 值从标准曲线计算实际浓度，乘以稀释倍数即得样本中 TFR2 含量。

四、关键参数
检测范围：通常为 15.6 pg/mL - 1000 pg/mL（不同试剂盒可能略有差异）。
灵敏度： 检测浓度（LOD）≤5 pg/mL。
特异性：与小鼠 TFR1、转铁蛋白（TF）等其他蛋白交叉反应率＜1%。
精密度：批内变异系数（CV）＜8%，批间 CV＜10%。
样本类型要求：血清：需用不含抗凝剂，室温凝固 1 小时后离心（2000g，10 分钟），取上清。
血浆：可用 EDTA 或肝素抗凝，离心后取上清，避免使用 NaN?防腐。
细胞培养上清：离心去除细胞碎片后直接检测，或按说明书稀释。

五、注意事项
试剂保存：未开封试剂盒 4℃保存，避免反复冻融；开封后微孔板需密封并置于干燥剂中，有效期内使用。
操作要点：试剂使用前需平衡至室温（18-25℃），避免温差影响反应。
加样需准确，避免交叉污染（建议使用移液器吸头更换）。
洗涤需 ，残留液体可能导致背景偏高或假阳性。
安全防护：终止液（硫酸）具有腐蚀性，需戴手套操作，避免接触皮肤和黏膜。
底物（TMB）需避光保存，显色时避免强光直射。
数据处理：若样本 OD 值超过标准品 浓度，需适当稀释后重新检测，结果乘以稀释倍数。
建议使用专业数据分析软件（如 GraphPad Prism）绘制标准曲线，避免手工计算误差。

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。

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