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产地 | 上海 |
保存条件 | 2-8° |
品牌 | DUMABIO |
货号 | DM-X6478 |
用途 | 科研实验 |
检测方法 | |
保质期 | 6个月 |
适应物种 | |
检测限 | |
数量 | 999 |
包装规格 | 48/96T |
标记物 | |
样本 | |
应用 | |
是否进口 | 否 |
小鼠转铁蛋白受体蛋白2(TFR2)酶联免疫试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断
产品货号:DM-X6478
产品规格:【48T/96T】
以下是关于 小鼠转铁蛋白受体蛋白 2(TFR2)酶联免疫试剂盒 的详细介绍,内容涵盖基本信息、原理、组成、操作流程、注意事项等关键内容:
一、基本信息
1. 试剂盒用途
检测对象:小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其他生物样本中 转铁蛋白受体蛋白 2(TFR2) 的含量。
2. 检测原理
方法:采用 双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。
原理:
试剂盒中预包被抗小鼠 TFR2 的单克隆抗体(捕获抗体)于微孔板表面。待样本中的 TFR2 与固相抗体结合后,加入生物素标记的检测抗体,形成 “固相抗体 - TFR2 - 生物素化抗体” 复合物。随后加入链霉亲和素 - HRP(辣根过氧化物酶),通过生物素 - 链霉亲和素系统放大信号。 加入底物(如 TMB),在酶催化下显色,颜色深浅与样本中 TFR2 含量呈正相关,通过酶标仪测定吸光度(OD 值)计算浓度。
三、操作流程(简要步骤)
试剂准备:
标准品复溶:按说明书加入指定体积蒸馏水,静置 10 分钟,涡旋混匀。
洗涤缓冲液稀释:20× 洗涤液用蒸馏水稀释为 1×(如 10mL 20× 液 + 190mL 水)。
检测抗体工作液和 HRP - 链霉亲和素工作液:按比例稀释(通常已预混,可直接使用)。
加样:
标准品:按梯度加入微孔板(如每孔 100μL),设复孔。
样本:血清 / 血浆需稀释(按说明书推荐比例,如 1:10 或 1:100),每孔加 100μL,设复孔。
空白对照:加蒸馏水或零标准品(通常为 孔)。
温育:
封板后,37℃孵育指定时间(如 60 分钟)。
洗涤:
弃去孔内液体,用 1× 洗涤液注满微孔,静置 30 秒后甩干,重复 3-5 次, 拍干。
加检测抗体工作液:
每孔加 100μL,37℃孵育 30-60 分钟,洗涤同上。
加 HRP - 链霉亲和素工作液:
每孔加 100μL,37℃孵育 30-60 分钟,洗涤同上。
显色:
每孔加 100μL 底物缓冲液(TMB),避光室温孵育 10-20 分钟(颜色变蓝)。
终止反应:
每孔加 50μL 终止液(硫酸),溶液由蓝变黄,立即测定 OD 值。
数据分析:
以标准品浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,绘制标准曲线(通常为对数曲线)。
根据样本 OD 值从标准曲线计算实际浓度,乘以稀释倍数即得样本中 TFR2 含量。
四、关键参数
检测范围:通常为 15.6 pg/mL - 1000 pg/mL(不同试剂盒可能略有差异)。
灵敏度: 检测浓度(LOD)≤5 pg/mL。
特异性:与小鼠 TFR1、转铁蛋白(TF)等其他蛋白交叉反应率<1%。
精密度:批内变异系数(CV)<8%,批间 CV<10%。
样本类型要求:血清:需用不含抗凝剂,室温凝固 1 小时后离心(2000g,10 分钟),取上清。
血浆:可用 EDTA 或肝素抗凝,离心后取上清,避免使用 NaN?防腐。
细胞培养上清:离心去除细胞碎片后直接检测,或按说明书稀释。
五、注意事项
试剂保存:未开封试剂盒 4℃保存,避免反复冻融;开封后微孔板需密封并置于干燥剂中,有效期内使用。
操作要点:试剂使用前需平衡至室温(18-25℃),避免温差影响反应。
加样需准确,避免交叉污染(建议使用移液器吸头更换)。
洗涤需 ,残留液体可能导致背景偏高或假阳性。
安全防护:终止液(硫酸)具有腐蚀性,需戴手套操作,避免接触皮肤和黏膜。
底物(TMB)需避光保存,显色时避免强光直射。
数据处理:若样本 OD 值超过标准品 浓度,需适当稀释后重新检测,结果乘以稀释倍数。
建议使用专业数据分析软件(如 GraphPad Prism)绘制标准曲线,避免手工计算误差。
结果分析
绘制标准曲线:以标准品浓度为横坐标,对应的吸光度值为纵坐标,在坐标纸上绘制标准曲线,或使用软件(如 Excel、GraphPad Prism 等)进行线性回归分析,得到标准曲线方程。
上海笃玛生物科技有限公司