小鼠甲状腺素抗体(TAb)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6461

产品规格：【48T/96T】

以下是小鼠甲状腺素抗体（TAb）酶联免疫试剂盒的详细介绍：
检测原理
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被小鼠甲状腺素抗体（TAb）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠甲状腺素抗体（TAb）呈正相关，用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成
微孔酶标板：通常为 8 孔 ×12 条或 8 孔 ×6 条的规格，已预包被抗小鼠 TAb 抗体。
检测抗体 - HRP：用于与 TAb 抗原结合，形成可被检测的复合物，一般有 10mL 或 5mL 装。
底物 A 和底物 B：通常为无色液体，混合后在 HRP 的作用下发生显色反应，A、B 液一般各有 6mL 或 3mL。
终止液：如硫酸溶液，用于终止酶 - 底物反应，使颜色稳定以便测量，通常为 6mL 或 3mL。
封板膜：用于在孵育过程中封住反应孔，防止污染和水分蒸发，一般有 2 张。
标准品：浓度已知的小鼠 TAb，用于绘制标准曲线，具体浓度值详见说明书。
洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附。

样本要求
血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2 - 8℃、1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
组织匀浆：用预冷的 PBS（0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。 将匀浆液于 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。
细胞培养物上清或其它生物标本：1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。标本溶血会影响 检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

主要参数
检测范围：因不同产品而异，需详见产品说明书。
灵敏度： 检测浓度小于 0.1U/L。
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内变异系数小于 10%，板间变异系数小于 15%。

操作步骤
将所有试剂平衡至室温 20 - 25℃。
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，样本孔加 50μL 样本。
除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
洗板，通常用洗涤缓冲液洗涤 3 - 5 次，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。
每孔加入底物 A 和底物 B 各 50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 - 15 分钟。
每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
以所测标准品的 OD 值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的 OD 值代入方程，计算出样品的浓度。

注意事项
试剂盒应在规定的温度下保存，不同组分的保存条件可能不同，需严格按照说明书要求执行。
操作过程中应使用干净的移液器和吸头，避免交叉污染。
洗涤过程要充分，以确保去除未结合的物质，但也要注意避免过度洗涤导致已结合的物质被洗脱。
底物溶液应避光保存，使用时避免接触强光。
严格按照说明书的操作步骤进行实验，包括孵育时间、温度和试剂加入量等，以确保结果的准确性。
所有样品、洗涤液和废弃物都应按生物安全要求进行处理，避免生物危害。

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。

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