小鼠促甲状腺素释放激素(TRH)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6460

产品规格：【48T/96T】

以下是小鼠促甲状腺素释放激素（TRH）酶联免疫试剂盒的详细介绍：
检测原理
一般采用双抗体夹心法或竞争法。以双抗体夹心法为例，预先包被小鼠 TRH 抗体的微孔板中，加入样本、标准品和 HRP 标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。若样本或标准品中存在 TRH，其会与包被抗体和检测抗体结合形成复合物。加入底物 TMB 后，在 HRP 的催化下，TMB 转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠 TRH 含量呈正相关，用酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品浓度。如果是竞争法，则是样本中的 TRH 和酶标 TRH 竞争结合包被抗体，样本中 TRH 含量越高，与包被抗体结合的酶标 TRH 越少，颜色越浅，与双抗体夹心法的检测原理略有不同。

试剂盒组成
微孔酶标板：已预包被抗小鼠 TRH 抗体，通常为 96 孔板，可用于同时检测多个样本。
标准品：一系列已知浓度的小鼠 TRH 标准品，用于绘制标准曲线，以便对样本中的 TRH 进行定量分析。
检测抗体 - HRP：与 TRH 特异性结合的抗体，标记有辣根过氧化物酶（HRP），用于后续的显色反应。
底物 A 和底物 B：通常为无色液体，混合后在 HRP 的作用下发生显色反应，生成有色产物，便于通过酶标仪进行检测。
终止液：如硫酸溶液，用于终止酶 - 底物反应，使颜色稳定下来，以便准确测量吸光度。
洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附，以保证检测的准确性。
封板膜：在孵育过程中封住反应孔，防止污染和水分蒸发，确保实验条件的稳定性。

样本要求
血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2 - 8℃、1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
组织匀浆：用预冷的 PBS（0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。 将匀浆液于 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。
细胞培养物上清或其它生物标本：1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。标本溶血会影响 检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

主要参数
检测范围：检测范围为 7.8 - 500pg/mL。
灵敏度：试剂盒灵敏度为 4.1pg/mL。
特异性：试剂盒对小鼠 TRH 具有高灵敏度和良好的特异性，与其他类似物无明显交叉反应。
重复性：板内变异系数和板间变异系数通常控制在一定范围内，以保证检测结果的稳定性和可靠性。

操作步骤
试剂准备：将试剂盒中的所有试剂平衡至室温（20 - 25℃），按照说明书要求进行稀释和配制。
加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品，样本孔加待测样本，通常每孔加样量为 50μL 或 100μL，具体参照试剂盒说明书。
温育：加入相应的检测抗体后，用封板膜封住反应孔，在 37℃水浴锅或恒温箱中温育一定时间，一般为 30 - 60 分钟。
洗板：用洗涤缓冲液洗涤微孔板，通常洗涤 3 - 5 次，以去除未结合的物质。洗涤时要注意充分洗涤，但避免过度洗涤导致已结合的物质被洗脱。
显色：每孔加入底物 A 和底物 B 各适量（如 50μL），轻轻震荡混匀，在 37℃避光条件下显色 10 - 15 分钟。
终止反应：每孔加入终止液（如 50μL），终止酶 - 底物反应。
读数：在规定时间内，用酶标仪在特定波长（如 450nm）处测定各孔的 OD 值。
结果计算：以所测标准品的 OD 值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，绘制标准曲线，并得到直线回归方程。将样品的 OD 值代入方程，计算出样品中 TRH 的浓度。

注意事项
试剂盒应在 2 - 8℃保存，不同组分的保存条件可能略有不同，需严格按照说明书要求执行。
操作过程中应使用干净的移液器和吸头，避免交叉污染。
洗涤过程要充分，以确保去除未结合的物质，但也要注意避免过度洗涤导致已结合的物质被洗脱。
底物溶液应避光保存，使用时避免接触强光。
严格按照说明书的操作步骤进行实验，包括孵育时间、温度

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。

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