小鼠促甲状腺细胞胚胎发育因子(TEF)酶联免疫试剂盒

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

产品货号：DM-X6459

产品规格：【48T/96T】

以下是小鼠促甲状腺细胞胚胎发育因子（TEF）酶联免疫试剂盒的详细介绍：
检测原理
通常采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗小鼠 TEF 抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的 TEF 会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠 TEF 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗小鼠 TEF 抗体与结合在包被抗体上的小鼠 TEF 结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被再次洗去。加入显色底物，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在特定波长处测 OD 值，TEF 浓度与 OD 值之间呈正比，通过绘制标准曲线可求出标本中 TEF 的浓度。

试剂盒组成
微孔酶标板：已预包被抗小鼠 TEF 抗体，一般为 96 孔板或 48 孔板，用于承载反应。
标准品：一系列已知浓度的小鼠 TEF 标准品，用于绘制标准曲线，以便对样本中的 TEF 进行定量分析。
检测抗体相关试剂：包括生物素化的抗小鼠 TEF 抗体和 HRP 标记的亲和素等，用于与 TEF 结合并进行后续的显色反应。
底物 A 和底物 B：通常为无色液体，混合后在 HRP 的作用下发生显色反应，生成有色产物，便于通过酶标仪进行检测。
终止液：如硫酸溶液，用于终止酶 - 底物反应，使颜色稳定下来，以便准确测量吸光度。
洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性吸附，保证检测的准确性。
封板膜：在孵育过程中封住反应孔，防止污染和水分蒸发，确保实验条件的稳定性。

样本要求
血清：全血标本于室温放置 2 小时或 4℃过夜后，于 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原、无内毒素试管。
血浆：抗凝剂推荐使用 EDTA，标本采集后 30 分钟内于 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，避免使用溶血、高血脂标本。
其他生物标本：如细胞培养上清等，1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测6。标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测，按一次使用量分装，冻存于 - 20℃或 -80℃电冰箱内，避免反复冻融，6 个月内进行检测，4℃保存的应在 1 周内进行检测。

主要参数
检测范围：不同品牌试剂盒的检测范围有所不同，需根据具体产品说明书确定。
灵敏度：即试剂盒能够检测到的 TEF 浓度，一般以 pg/mL 为单位，具体数值因产品而异。
特异性：试剂盒对小鼠 TEF 具有高灵敏度和良好的特异性，与其他类似物无明显交叉反应。
重复性：包括板内变异系数和板间变异系数，通常要求变异系数控制在一定范围内，以保证检测结果的稳定性和可靠性。

操作步骤
试剂准备：将试剂盒中的所有试剂平衡至室温（20 - 25℃），按照说明书要求进行稀释和配制。
加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品，样本孔加待测样本，一般每孔加样量为 50μL 或 100μL，具体参照试剂盒说明书。
温育：加入相应的检测抗体后，用封板膜封住反应孔，在 37℃水浴锅或恒温箱中温育一定时间，通常为 30 - 60 分钟。
洗板：用洗涤缓冲液洗涤微孔板，一般洗涤 3 - 5 次，以去除未结合的物质。
显色：每孔加入底物 A 和底物 B 各适量，轻轻震荡混匀，在 37℃避光条件下显色 10 - 15 分钟。
终止反应：每孔加入终止液，终止酶 - 底物反应。
读数：在规定时间内，用酶标仪在特定波长（如 450nm）处测定各孔的 OD 值。
结果计算：以所测标准品的 OD 值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，绘制标准曲线，并得到直线回归方程。将样品的 OD 值代入方程，计算出样品中 TEF 的浓度。

注意事项
试剂盒应在 2 - 8℃保存，不同组分的保存条件可能略有不同，需严格按照说明书要求执行。
操作过程中应使用干净的移液器和吸头，避免交叉污染。
洗涤过程要充分，以确保去除未结合的物质，但也要注意避免过度洗涤导致已结合的物质被洗脱。
底物溶液应避光保存，使用时避免接触强光。
严格按照说明书的操作步骤进行实验，包括孵育时间、温度和试剂加入量等，以确保结果的准确性。
所有样品、洗涤液和废弃物都应按生物安全要求进行处理，避免生物危害。

结果分析

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线，或使用软件（如 Excel、GraphPad Prism 等）进行线性回归分析，得到标准曲线方程。

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