牛（Bovine）支原体（Mycoplasma）ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-Cat6943

产品规格：48/96T

牛支原体（Mycoplasma）ELISA 检测试剂盒主要用于检测牛相关样本中的牛支原体，以下是详细介绍：

预期用途：主要用于检测牛血清中牛支原体抗体，也可用于牛的辅助诊断，为牛支原体病的防控提供依据，还可用于疫苗免疫效果评估等。

检测原理：一般采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被支原体抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP 标记的检测抗体，经过温育并 洗涤，用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度，与临界值相比较，从而判定标本中牛支原体的存在与否。
试剂盒组成：通常包括微孔酶标板、检测抗体 - HRP、20× 洗涤缓冲液、样本稀释液、底物 A、底物 B、终止液、封板膜和自封袋等。

样本要求：常见的样本有血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆等。血清需使用不含热原和内毒素的试管采集，血液收集后 3000 转离心 10 分钟分离血清；血浆可用 EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000 转离心 30 分钟取上清。若样本收集后不及时检测，应按一次用量分装，冻存于 - 20℃，避免反复冻融。

操作步骤：先将 20× 洗涤缓冲液用蒸馏水按 1：20 稀释。设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各 50μL；待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL。随后各孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，37℃温育 60min。弃去液体，洗板 5 次，每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min， 每孔加入终止液 50μL，15min 内于 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结果判定：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00，阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15 时，试验结果有效。临界值 = 阴性对照孔平均值 + 0.15，样品 OD 值＜临界值为阴性，样品 OD 值＞临界值为阳性。
性能指标：敏感性方面， 检测限可达 1:1280。特异性良好，不与牛口蹄疫、牛结核等阳性血清发生交叉反应。重复性佳，批内变异系数≤10%，批间变异系数≤15%。

注意事项：试剂盒从冷藏环境取出后需在室温平衡一段时间再使用，所有试剂应按要求保存，避免使用过期试剂。操作过程中要注意避免交叉污染，使用的水应符合要求，终止液含磷酸，需妥善处理。

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