猪肝细胞生长因子(HGF)酶联免疫试剂盒 

产品货号：DM-P7323

产品规格：48/96T

以下是猪肝细胞生长因子（HGF）酶联免疫试剂盒的详细介绍：
检测原理
通常采用双抗体夹心 ELISA 方法。将特异性的抗猪 HGF 抗体包被于酶标板上，加入标准品及待测样品，样品及标准品中的 HGF 蛋白会被固相抗体捕获。然后加入生物素化的检测抗体，它与已结合在固相抗体上的 HGF 抗原特异性结合，再加入链霉亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP）结合物，链霉亲和素与生物素结合，将 HRP 连接到免疫复合物上。加入底物 TMB 后，在 HRP 酶的催化下，TMB 转化成蓝色，加入终止液后变为黄色。颜色的深浅和样品中的 HGF 含量呈正相关，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），根据 OD 值绘制标准曲线，从而计算出样品中 HGF 的浓度。
试剂盒组成
酶标板：预包被有抗猪 HGF 特异性抗体的微孔板。
标准品：通常为已知浓度的猪 HGF 蛋白，用于绘制标准曲线，一般会有多个不同浓度的标准品，如浓度为 800ng/L、400ng/L、200ng/L、100ng/L、50ng/L、25ng/L、12.5ng/L、0ng/L 等。
检测抗体：生物素标记的抗猪 HGF 特异性抗体。
酶结合物：链霉亲和素 - HRP 结合物。
底物溶液：TMB 底物，在 HRP 的作用下发生显色反应。
终止液：一般为稀硫酸溶液，用于终止显色反应。
洗涤液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。
其他：还可能包括标准品稀释液、检测缓冲液、封板膜、说明书等。
样本要求
可检测猪的血清、血浆、尿液、组织匀浆及其他生物体液。具体要求如下：

血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
血浆：用枸橼酸盐或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2 - 8℃、1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
尿液：用无菌管收集，1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测。
其它生物标本：离心取上清检测，上清可置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融，4℃保存应小于 1 周，-20℃保存小于 6 个月，标本溶血会影响检测结果，不宜使用。标本使用前应缓慢平衡至室温，不应加热使之溶解。
检测范围
不同试剂盒的检测范围有所不同，例如有的试剂盒检测范围为 31.25 - 2000pg/mL，也有试剂盒的检测范围在 0.125 - 8ng/mL 等。
保存条件
通常需将试剂盒保存在 2 - 8℃的冷藏环境中，避免冷冻，在有效期内使用，不同试剂盒的有效期可能有所差异，一般为 6 - 12 个月，具体以产品说明书为准。
操作步骤
准备工作：提前 20 - 30 分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（18 - 25℃）。将所需的样本、标准品、试剂等准备好，并按照说明书的要求进行稀释和分装。
加样：将标准品和待检测样本分别加入到酶标板的相应孔中，一般每个样本和标准品需要设置复孔，加样量通常为 50 - 100μL，具体根据试剂盒说明书操作。
温育：加样完成后，将酶标板盖上封板膜，在规定的温度（如 37℃）下温育一定时间（通常为 30 - 60 分钟），使样本中的 HGF 抗原与固相抗体充分结合。
洗涤：温育结束后，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤酶标板，洗涤次数一般为 3 - 5 次，每次洗涤后要尽量吸干孔内的液体，以去除未结合的物质。
加检测抗体：向每个孔中加入生物素标记的检测抗体，加样量和温育条件按照说明书执行，再次温育使检测抗体与结合在固相抗体上的 HGF 抗原结合。
洗涤：同步骤 4，再次洗涤酶标板，去除未结合的检测抗体。
加酶结合物：加入链霉亲和素 - HRP 结合物，温育一段时间，使酶结合物与生物素标记的检测抗体结合。
洗涤：重复洗涤步骤，以去除未结合的酶结合物。
显色：加入底物 TMB 溶液，避光温育（如 37℃，15 - 30 分钟），在 HRP 酶的催化下，TMB 发生显色反应，溶液由无色变为蓝色。
终止反应：加入终止液，使蓝色溶液变为黄色，并立即在酶标仪上于 450nm 波长处测定各孔的吸光度（OD 值）。
结果计算：根据标准品的浓度和对应的 OD 值绘制标准曲线，然后将样本的 OD 值代入标准曲线方程中，计算出样本中 HGF 的浓度。如果样本的 OD 值高于标准曲线的上限，需要将样本适当稀释后重新检测，并在计算浓度时乘以相应的稀释倍数。
试剂盒性能指标
灵敏度：指试剂盒能够检测到的 HGF 浓度，如 12.4pg/mL 或 0.025ng/mL 等。
特异性：试剂盒应只对猪 HGF 蛋白有特异性反应，与其他类似的蛋白质或生物分子无明显交叉反应。
重复性：包括批内重复性和批间重复性。批内重复性要求在同一试剂盒内，对同一样本进行多次检测，结果的变异系数（CV）通常小于 10%；批间重复性要求不同批次的试剂盒对同一样本进行检测，结果的 CV 一般小于 15%。
回收率：在已知浓度的样本中加入一定量的 HGF 标准品，然后用试剂盒进行检测，计算回收率，回收率一般应在 80% - 120% 范围内。