采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）原理。试剂盒中的酶标板预先包被有针对猪 TRAIL/TNFSF10 的特异性抗体。加入标准品或样品后，其中的 TRAIL/TNFSF10 会与包被抗体结合。接着加入生物素化的检测抗体，它会特异性地结合到已与包被抗体结合的 TRAIL/TNFSF10 上。然后加入亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP）复合物，亲和素与生物素结合，形成 “包被抗体 - TRAIL/TNFSF10 - 生物素化检测抗体 - 亲和素 - HRP” 的夹心结构。加入四甲基联苯胺（TMB）底物溶液后，HRP 催化 TMB 显色，颜色反应的深浅与样本中 TRAIL/TNFSF10 的浓度成正比。加入硫酸溶液终止反应后，用酶标仪在 450nm 波长处测量吸光度（OD 值），通过与标准曲线对比，计算出样品中 TRAIL/TNFSF10 的浓度。

试剂盒组分

通常包括预包被酶标板、TRAIL/TNFSF10 标准品、生物素化抗体、浓缩 ABC 复合物（亲和素 - 生物素 - 过氧化物酶复合体）、TMB 底物溶液、硫酸终止液、洗涤液等。还可能包含标准品稀释液、样品稀释液等。

样本要求

血清：全血标本室温放置 2 小时或 4℃过夜后，于 1000g 离心 20 分钟，取上清检测。若不能及时检测，可将标本放于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。

血浆：可用乙二胺四乙酸（EDTA）或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8℃、1000g 离心 20 分钟，取上清检测。若不能及时检测，可将标本放于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。

组织匀浆：用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS，0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎，按重量体积比加入 PBS（一般为 1:9），加入蛋白酶抑制剂后，于玻璃匀浆器中冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融，然后于 5000g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。

细胞培养物上清或其它生物标本：1000g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将标本放于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。

试剂盒性能

特异性：试剂盒对猪 TRAIL/TNFSF10 具有特异性，与其他细胞因子或蛋白无明显交叉反应。

灵敏度：可达到 15.625 - 1000pg/mL 左右，能够检测到生物样本中低浓度的 TRAIL/TNFSF10。

检测范围：通常为 0.1 - 100ng/mL 或 10 - 10000pg/mL 等，具体范围因试剂盒品牌和型号而异。

重复性：板内和板间变异系数均小于 10%，保证了检测结果的稳定性和可靠性。