羊免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒

产品货号：DM-Sh46038

产品规格：48/96T

羊免疫球蛋白 M（IgM）ELISA 试剂盒是一种用于定量检测羊血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中免疫球蛋白 M（IgM）含量的试剂盒，以下是其详细介绍：

检测原理
双抗体夹心法：以纯化的羊免疫球蛋白 M（IgM）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体。往包被的微孔中依次加入羊免疫球蛋白 M（IgM）样本、标准品，再与 HRP 标记的检测抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物。经过 洗涤后加底物 TMB 显色，TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的羊免疫球蛋白 M（IgM）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中羊免疫球蛋白 M（IgM）的含量。

竞争法：利用单克隆抗 - 羊 IgM 抗体和羊 IgM - HRP 偶联物，将样本和缓冲液与羊 IgM - HRP 偶联物一起在预包被板中孵育。孵育后，倒掉孔内液体并洗涤，然后与 HRP 酶的底物孵育，酶 - 底物反应的产物形成蓝色复合物，加入终止溶液后反应停止，溶液变为黄色。颜色强度与羊 IgM 浓度成反比，因为样本中的 IgM 和 IgM - HRP 偶联物竞争抗 - 羊 IgM 抗体结合位点，根据标准曲线计算样品中羊 IgM 的浓度。

试剂盒组成
微孔酶标板：通常为 96 孔或 48 孔板，预包被有羊 IgM 捕获抗体。
标准品：一般有 6 - 7 个不同浓度的标准品，用于绘制标准曲线，如浓度依次为 0、150、300、600、1200、2400μg/mL 等。
检测抗体 - HRP：与羊 IgM 特异性结合的抗体，标记有辣根过氧化物酶，用于后续的显色反应。
洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性结合。
底物 A 和底物 B：通常是 TMB 底物，混合后在 HRP 酶的作用下发生显色反应。
终止液：如硫酸溶液，用于终止显色反应，使颜色稳定，便于酶标仪读数。
封板膜：用于在温育过程中密封微孔板，防止水分蒸发和外界污染。

检测范围与灵敏度
检测范围： 75μg/mL - 2400μg/mL 。
灵敏度： 检测浓度小于 10μg/mL。

样品要求
血清：使用不含热原和内毒素的试管，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆：可用 EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000 转离心 30 分钟取上清。
细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎，3000 转离心 10 分钟取上清。
保存：样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于 4℃，若不能及时检测，按一次使用量分装，冻存于 - 20℃（1 个月内检测），或 - 80℃（6 个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响 检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤
准备：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15 - 30 分钟，样本在使用前也要在室温平衡 60 分钟，同时准备好所需的实验器材，如酶标仪、高精度加样器等。
加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不加。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
洗涤：温育后弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
显色：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
终止：每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

试剂盒性能
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值通常大于等于 0.9900。
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。

注意事项
严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果，所有试剂都必须在使用前达到室温 20 - 25℃，使用后立即冷藏保存试剂。
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
在储存和温育时避免强光直接照射。
所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。