羊免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒

产品货号：DM-Sh46036

产品规格：48/96T

羊免疫球蛋白 A（IgA）ELISA 试剂盒是一种用于定量检测羊血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中免疫球蛋白 A（IgA）含量的试剂盒。以下是其详细介绍：
检测原理
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被绵羊免疫球蛋白 A（IgA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的绵羊免疫球蛋白 A（IgA）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成
30 倍浓缩洗涤液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质，减少非特异性结合。
酶标试剂：即 HRP 标记的检测抗体，与羊 IgA 特异性结合，用于后续的显色反应。
终止液：如硫酸溶液，用于终止显色反应，使颜色稳定，便于酶标仪读数。
标准品：一般为浓度 200μg/ml 的标准品，可按照试剂盒说明书进行稀释，以绘制标准曲线。
其他：还可能包括微孔酶标板、样品稀释液、显色剂 A 和显色剂 B 等。

检测范围与灵敏度
检测范围： 3μg/ml - 100μg/ml 。
灵敏度： 检测浓度通常小于 1.0μg/ml。

样品要求
标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 - 20℃保存，但应避免反复冻融。
不能检测含 NaN?的样品，因 NaN?抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤
标准品稀释：按照试剂盒提供的方法对标准品进行稀释。
加样：在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
再次温育：同 次温育操作。
再次洗涤：同 次洗涤操作。
显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟。
终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

试剂盒性能
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内、板间变异系数通常符合相关要求。

注意事项
严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20 - 25℃，使用后立即冷藏保存试剂。
避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
在储存和温育时避免强光直接照射。