活性氧(ROS)ELISA

产品货号：DM-Sh46035

产品规格：48/96T

活性氧（ROS）ELISA 试剂盒是一种用于定量检测生物样本中活性氧含量的试剂盒，以下是其详细介绍：
检测原理
采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。用纯化的 ROS 捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入 ROS，再与 HRP 标记的检测抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过 洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 ROS 呈正相关，用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中 ROS 的含量。

试剂盒组成
酶标包被板：预先包被有 ROS 捕获抗体的微孔板。
标准品：已知浓度的 ROS 标准溶液，用于绘制标准曲线。
酶标试剂：HRP 标记的检测抗体，与 ROS 特异性结合。
显色剂 A 和显色剂 B：通常 A 液为无色透明液体，B 液为无色或淡黄色透明液体，两者混合后在 HRP 的作用下发生显色反应。
终止液：如硫酸溶液，用于终止显色反应。
洗涤液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。
说明书：包含试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等详细信息。

样品要求
血清：室温血液自然凝固 10 - 20 分钟，离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
血浆：根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10 - 20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2 - 7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2 - 8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

操作步骤
标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL。
加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
加酶：每孔加入酶标试剂 100μl，空白孔除外。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟。
终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

注意事项
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15 - 30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡 60 分钟。
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
请每次测定的同时做标准曲线， 做复孔。如标本中待测物质含量过高，先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时乘以总稀释倍数。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。