可溶性CD4分子(sCD4)ELISA

产品货号：DM-Sh46034

产品规格：48/96T

可溶性 CD4 分子（sCD4）ELISA 试剂盒是一种用于定量检测生物样本中可溶性 CD4 分子含量的试剂盒，以下是其详细介绍：
检测原理
通常采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。以人可溶性 CD4 分子（sCD4）ELISA 试剂盒为例，在预包被抗人可溶性 CD4 分子抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人可溶性 CD4 分子校准品和待测样本，再加入另一株 HRP 标记的抗人可溶性 CD4 分子抗体（酶标抗体）。经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体 - 抗原 - 酶标抗体的夹心复合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，产生蓝色产物，在终止液作用下，最终转化为黄色。在酶标仪 450nm 波长上测定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品中可溶性 CD4 分子的浓度正相关，拟合校准品曲线，可以计算出样本中可溶性 CD4 分子的浓度。

试剂盒组成
酶标包被板：已包被抗 sCD4 抗体的微孔板。
标准品：已知浓度的 sCD4 标准溶液，用于绘制标准曲线。
酶标试剂：如 HRP 标记的抗 sCD4 抗体。
显色剂 A 和显色剂 B：混合后在 HRP 作用下发生显色反应。
终止液：如硫酸溶液，用于终止显色反应。
洗涤液：通常为浓缩液，使用时需按要求稀释，用于洗涤微孔板。
说明书：包含试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等详细信息。

样品要求
血清：操作过程中避免任何细胞刺激，使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测，1000×g 离心 30 分钟去除颗粒。
细胞上清液：1000×g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎，1000×g 离心 10 分钟，取上清液。
保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分 -70℃保存，避免反复冷冻。尽可能不要使用溶血或高xve脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37℃或更高的温度加热解冻，应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作步骤
试剂准备：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存，稀释前将标准品振荡混匀；洗涤缓冲液若为浓缩液，需按要求用蒸馏水稀释。
加样：分别设空白孔、标准品孔和待测样品孔。在酶标包被板上，标准品孔各加不同浓度的标准品，待测样品孔中先加样品稀释液，然后再加待测样品。加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：加样后用封板膜封板，按说明书要求的温度和时间进行温育。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置一段时间后弃去，如此重复多次，拍干。
加酶标试剂：每孔加入酶标试剂，空白孔除外，然后进行温育。
再次洗涤：同前一步的洗涤步骤。
显色：每孔先加入显色剂 A，再加入显色剂 B，轻轻震荡混匀，按要求避光显色。
终止：每孔加终止液，终止反应，此时颜色会发生变化，如蓝色立转黄色。
测定：以空白孔调零，在 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。

注意事项
试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释过后的标准品应丢弃，不可保存。
不用的其它试剂应包装好或盖好，不同批号的试剂不要混用，在保质期前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B 液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物 A 应防止挥发，避免长时间打开盖子，底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免用手接触，有毒，实验完成后应立即读取 OD 值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
严格按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。