绵羊a-防御素酶联免疫试剂盒

产品货号：DM-Sh46032

产品规格：48/96T

以下是绵羊 α - 防御素酶联免疫试剂盒的详细介绍：
检测目的
用于体外定量检测绵羊血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中绵羊 α - 防御素的含量。

实验原理
通常采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。将纯化的绵羊 α - 防御素捕获抗体包被在微孔板上，制成固相抗体。往包被好的微孔中依次加入标本、标准品以及 HRP 标记的检测抗体，经过温育并 洗涤后，去除未结合的物质。然后加入底物 TMB，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的绵羊 α - 防御素呈正相关，用酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线即可计算出样品中绵羊 α - 防御素的浓度。

试剂盒组成
酶标包被板：预包被有绵羊 α - 防御素捕获抗体。
标准品：已知浓度的绵羊 α - 防御素标准溶液，用于绘制标准曲线。
酶标试剂：含有 HRP 标记的检测抗体。
显色剂 A 液和 B 液：如 TMB 底物等，用于产生颜色反应。
终止液：一般为硫酸等酸性溶液，用于终止显色反应。
洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。
标本稀释液：用于稀释样品。
其他：还可能包括封板膜、密封袋、说明书等。

样本处理
血清：室温下让血液自然凝固 10 - 20 分钟，然后离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分），取上清液。
血浆：使用 EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝，混合 10 - 20 分钟后离心 20 分钟左右（2000 - 3000 转 / 分），收集上清。
组织匀浆：将组织样本剪碎，加入适量的匀浆缓冲液，在冰浴中进行匀浆处理，然后离心，取上清液。
其他液体样本：如细胞培养上清等，根据具体情况进行离心等处理，去除杂质。

样本收集后应尽快检测，若不能马上进行试验，可将标本放在 - 20℃或 - 80℃保存，但要避免反复冻融。
操作步骤
实验前先将试剂盒平衡至室温，取出所需的微孔板条，剩余板条用封板膜密封放回 4℃保存。
设置标准品孔、空白对照孔和样品孔。在标准品孔中加入不同浓度的标准品，在样品孔中加入处理好的样品，同时设置空白对照孔（只加缓冲液）。
加入酶标试剂，轻轻振荡混匀，然后温育一段时间，一般在 37℃温育 30 - 60 分钟。
温育结束后，用洗涤缓冲液洗涤微孔板，通常洗 3 - 5 次，每次浸泡 1 - 2 分钟，然后拍干。
加入显色剂 A 液和 B 液，轻轻振荡混匀，避光显色 15 - 30 分钟左右，观察颜色变化。
加入终止液，终止显色反应，此时颜色应从蓝色变为黄色。
用酶标仪在规定的波长下（如 450nm）测定各孔的 OD 值。

试剂盒性能
准确性：样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值应在 0.95 以上。
精密度：批内变异系数（CV%）应小于 10%，批间变异系数应小于 15%。
灵敏度：能检测到的 绵羊 α - 防御素浓度通常小于 1.0pg/mL，不同试剂盒可能有所差异。
特异性：试剂盒应与其他相关蛋白或物质无交叉反应，只对绵羊 α - 防御素具有特异性识别和检测能力。