可溶性CD8分子(sCD8)ELISA

产品货号：DM-Sh46033

产品规格：48/96T

以下是可溶性 CD8 分子（sCD8）ELISA 的详细介绍：
检测目的
用于体外定量检测各种生物样本（如血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等）中可溶性 CD8 分子的含量。

实验原理
通常采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。将针对 sCD8 的特异性抗体包被在微孔板上，制成固相抗体。加入待检测的样本和标准品后，样本中的 sCD8 分子会与固相抗体结合。接着加入 HRP（辣根过氧化物酶）标记的另一种抗 sCD8 抗体，形成固相抗体 - sCD8 - 酶标抗体的夹心复合物。加入底物后，底物在 HRP 的催化下发生显色反应，颜色的深浅与样本中 sCD8 的浓度呈正相关。通过酶标仪测定吸光度（OD 值），并与标准曲线对比，即可计算出样本中 sCD8 的浓度。

试剂盒组成
酶标包被板：预包被有抗 sCD8 抗体的微孔板。
标准品：已知浓度的 sCD8 标准溶液，用于绘制标准曲线。
酶标试剂：含有 HRP 标记的抗 sCD8 抗体。
显色剂：一般包括 A 液和 B 液，混合后在 HRP 作用下产生颜色反应。
终止液：通常为酸性溶液，用于终止显色反应。
洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。
标本稀释液：用于稀释样本，使样本浓度在检测范围内。

样本处理
血清：采集血液后，室温下让血液自然凝固，然后离心，取上清液。
血浆：使用合适的抗凝剂（如 EDTA、肝素等）抗凝，离心后取上清。
细胞培养上清：直接收集细胞培养后的上清液，如有需要可进行离心去除细胞碎片。
组织匀浆：将组织样本剪碎，加入匀浆缓冲液进行匀浆处理，离心后取上清液。

样本收集后应尽快检测，若不能及时检测，需将标本放在 -20℃或 -80℃保存，避免反复冻融。
操作步骤
实验前先将试剂盒平衡至室温，取出所需的微孔板条，剩余板条用封板膜密封放回 4℃保存。
设置标准品孔、空白对照孔和样品孔。在标准品孔中加入不同浓度的标准品，在样品孔中加入处理好的样品，空白对照孔只加缓冲液。
加入酶标试剂，轻轻振荡混匀，然后在规定的温度（如 37℃）下温育一段时间（通常为 30 - 60 分钟）。
温育结束后，用洗涤缓冲液洗涤微孔板，一般洗 3 - 5 次，每次浸泡 1 - 2 分钟，然后拍干。
加入显色剂 A 液和 B 液，轻轻振荡混匀，避光显色一定时间（如 15 - 30 分钟），观察颜色变化。
加入终止液，终止显色反应，此时颜色会发生相应变化（如从蓝色变为黄色）。
用酶标仪在规定的波长（如 450nm）下测定各孔的 OD 值。根据标准品的 OD 值绘制标准曲线，再根据样品的 OD 值从标准曲线上计算出样品中 sCD8 的浓度。
试剂盒性能
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值通常应大于等于 0.99。
灵敏度： 检测浓度一般小于 1.0 ng/mL，不同试剂盒可能有所差异。
特异性：试剂盒应只对 sCD8 分子具有特异性识别能力，与其他可溶性结构类似物无明显交叉反应。
重复性：板内、板间变异系数均应小于 15%。