绵羊凋亡相关因子配体(FASL/TNFSF6)酶联免疫试剂盒

产品货号：DM-Sh45980

产品规格：48/96T

绵羊凋亡相关因子配体（FASL/TNFSF6）酶联免疫试剂盒是用于定量检测绵羊体内 FASL/TNFSF6 含量的工具，以下是其详细介绍：

检测原理：采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术。特异性抗绵羊 FASL/TNFSF6 抗体预包被在高亲和力的酶标板上，酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体，经过孵育，样本中存在的 FASL/TNFSF6 与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP），再加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中 FASL/TNFSF6 的浓度成正比，加入终止液终止反应，在 450nm 波长（参考波长 570-630nm）测定吸光度值，即可从标准曲线上计算出样本中 FASL/TNFSF6 的浓度。

试剂盒组成：一般包含预包被有抗绵羊 FASL/TNFSF6 抗体的微孔酶标板、FASL/TNFSF6 标准品、样本稀释液、生物素标记的检测抗体、HRP 标记的链霉亲和素、浓缩洗涤液、底物 A（如 TMB）、底物 B、终止液、封板膜和说明书等。

检测范围：检测范围在 15.625-1000pg/mL 左右，具体需参照相应试剂盒的说明书。

样本类型：适合检测绵羊的血清、血浆、细胞培养上清、细胞或组织裂解液等。

操作步骤：

准备工作：提前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（18-25℃）。将浓缩洗涤液用双蒸水按比例稀释，如 1:24 稀释。将标准品于 10000×g 离心 1 分钟，加入标准品及样本稀释液溶解后，进行倍比稀释，配制成所需浓度的标准品工作液。

加样：分别设定标准孔、空白孔和样本孔。标准孔加入 100μL 倍比稀释的标准品，空白孔加入 100μL 标准品及样本稀释液，其余孔加入 100μL 待测样本，给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。

加入生物素化抗体：甩尽孔内液体，不用洗涤，每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL，酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。

洗涤：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液 350μL，浸泡 1 分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，拍干，重复此洗板步骤 3 次。

加入酶结合物：每孔加酶结合物工作液 100μL，酶标板加上覆膜，37℃温育 30 分钟。

再次洗涤：甩尽孔内液体，洗板 5 次，方法同步骤 4。

显色：每孔加底物溶液（TMB）90μL，酶标板加上覆膜，37℃避光孵育 15 分钟左右，根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。

终止反应：每孔加终止液 50μL，终止反应。

测定：立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。

注意事项：实验过程中要避免交叉污染，加样要准确，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。洗涤要充分，以去除未结合的物质，但洗涤过程中不要让微孔板干燥。底物溶液应避光保存，使用时避免光照。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。应严格按照所使用试剂盒的说明书进行操作。