产品货号：DM-D9702

产品规格：48/96T

方法学与用途

• 方法：竞争法 ELISA（预包被 14,15-DHET 抗体；样本 14,15-EET 与 14,15-DHET-HRP 竞争结合；TMB 显色，450 nm 读板）。
• 适用样本：血清、血浆、尿液、细胞培养上清 / 提取物、组织匀浆等（需先分离纯化）。
• 用途：科研定量检测大鼠 14,15-EET，不用于临床诊断。

试剂盒组成（通用）

• 预包被 96 孔板（可拆卸条）
• 冻干 / 液体标准品（复溶后梯度稀释）
• 14,15-DHET-HRP 标记物（浓缩，如 1000×）
• 洗涤缓冲液（浓缩，如 10×/20×）
• TMB 底物、终止液
• 样品 / 通用稀释液、封板膜、说明书

性能指标（典型范围）

• 检测范围：常见为 0.03–1 ng/mL（品牌间波动）。
• 灵敏度（LOD）：约 0.01–0.02 ng/mL（依基质与批次而变）。
• 精密度：板内 / 板间 CV 一般 <10%。
• 回收率：样本加标回收率通常 80%–120%。
• 特异性：对 14,15-EET/DHET 特异，与类似物无明显交叉（以说明书为准）。

操作要点（通用流程）

1. 试剂与板平衡至室温（18–25℃），洗涤液按比例稀释并预热溶解结晶（必要时）。
2. 标准品复溶后倍比稀释（如 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0 ng/mL），现配现用。
3. 每孔加样品（必要时稀释）与 14,15-DHET-HRP，37℃ 孵育（如 60–90 min），洗板 3–5 次。
4. 加 TMB，37℃ 避光显色约 15 min（不超 30 min）。
5. 加终止液，立即于 450 nm 读 OD；用四参数逻辑曲线计算样本浓度（竞争法为负相关）。

样本处理要点

• 血清 / 血浆：采集后尽快分离，避免溶血 / 脂血；-20℃（短期）或 -80℃（长期）保存，避免反复冻融。
• 尿液：离心取上清；必要时用试剂盒提供的通用稀释液进行基质匹配。
• 组织 / 细胞：匀浆 / 提取后高速离心取上清；需先进行纯化或按说明书预处理，以去除干扰物质。

保存与稳定性

• 未开封板与标准品：多为 2–8℃ 或 -20℃（依说明书）。
• 液体试剂：2–8℃ 避光保存；HRP 标记物与 TMB 避免反复冻融。
• 开封后：板条干燥密封，按说明书规定条件与期限保存。

注意事项

• 试剂使用前需室温平衡；洗涤要充分且避免孔内干燥。
• TMB 应为无色；若已变蓝或浑浊，弃用。
• 封板膜密封孵育，避免蒸发与污染；避免试剂与漂白剂接触。
• 不同品牌 / 批号组分不得混用；试剂盒外重组蛋白可能不匹配。
• 高值样本需稀释后重测，并乘以总稀释倍数。

常见问题排查

• 标准曲线异常：检查复溶、稀释与封板膜密封。
• 高背景 / 无信号：确认洗板次数与残留；检查底物是否污染或失效。
• 回收率异常：评估基质效应与加标水平，必要时做基质匹配。