关键参数一览

• 方法学：竞争法（包被抗原与样本 5-HT 竞争结合生物素标记抗体，HRP 酶联，TMB 显色，450 nm 读数）。
• 检测范围：约 2.81–180 ng/mL（随试剂盒批次略有差异）。
• 灵敏度： 检测浓度约 1.44 ng/mL（同前）。
• 特异性：与结构类似物无明显交叉反应。
• 重复性：板内与板间 CV 均 < 10%。
• 样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等。
• 标本体积：通常上样 50 μL；超上限用样本稀释液稀释后重测。
• 标准品：常见 6 点（示例：180、90、45、22.5、11.25、5.625 ng/mL，以说明书为准）。
• 仪器：酶标仪，450 nm 读数。
• 保存条件：2–8℃，有效期 6 个月。

试剂盒组成（示例）

• 预包被微孔板（96 孔 / 48 孔）
• 标准品 6 管 × 0.3 mL（常见 6 点）
• 生物素标记检测抗体、HRP 标记亲和素 / 链霉亲和素
• 20× 洗涤缓冲液（25 mL/15 mL）
• 显色底物 A/B（TMB 体系）、终止液
• 样本稀释液、盖板膜等

实验流程要点

1. 试剂与样本恢复至室温 20–25℃；洗涤缓冲液稀释至 1×。
2. 加样：标准品与样本各 50 μL / 孔；超上限用样本稀释液稀释后重测。
3. 加生物素标记抗体与 HRP 标记物，按规定温度与时间温育并充分洗涤。
4. 加 TMB 显色，适时加终止液，于酶标仪 450 nm 读取 OD 值。
5. 以标准品 OD 绘制标准曲线（常用 4 参数 / 对数拟合），计算样本浓度。

样本处理与保存

• 血清 / 血浆：采集后尽快离心取上清；短期 4℃，长期 -20℃/-80℃，避免反复冻融；溶血样本可能影响结果。
• 组织匀浆 / 细胞上清：1000×g 离心 20 分钟，取上清检测；保存同上。
• 外观：应清澈透明；如有悬浮物，先离心后再上样。

性能与质量控制

• 灵敏度与检测范围需覆盖目标样本的生理 / 病理区间。
• 特异性：对结构类似物交叉反应应可忽略。
• 重复性：板内与板间 CV 均 < 10%，用于批内与批间质量控制。

注意事项

• 严格按规定温度与时间温育；所有试剂使用前恢复室温。
• 充分洗涤并拍干板底残留液体与指纹，避免影响 OD。
• 避免试剂与样本交叉污染；操作与保存避免强光直射。
• 试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断。
• 不同批次的检测范围、灵敏度与显色时间可能不同，结果不可直接跨方法比较。

温馨提示

• 本信息基于 “大鼠 5-HT ELISA（竞争法）” 公开资料综合整理；如你关注 “5-HT4 受体” 等其他指标，其方法学多为双抗体夹心法，检测范围与灵敏度不同，请勿混淆。