关键参数一览

• 方法学：双抗体夹心（包被抗 HA/HA 结合蛋白 + 生物素化二抗 + HRP - 亲和素 / 链霉亲和素，TMB 显色，450 nm 读数）。
• 检测范围：常见为 11.25–360 pg/mL 或 1.56–100 nmol/L（随试剂盒批次略有差异）。
• 灵敏度： 检测浓度通常在 pg/mL 级别（同前）。
• 特异性：对结构类似物交叉反应可忽略。
• 重复性：板内与板间 CV 一般 < 10%（以说明书为准）。
• 样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞上清等。
• 标本体积：上样量因方法而异（常见 10–50 μL）；超上限需用指定稀释液稀释后重测。
• 标准品：多为 6–8 点，如 360、180、90、45、22.5、11.25 pg/mL 或 100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56 nmol/L（以说明书为准）。
• 仪器：酶标仪，450 nm 读数。
• 保存条件：2–8℃（部分试剂可 -20℃），有效期 6–12 个月（依试剂盒而定）。

试剂盒组成（示例）

• 预包被微孔板（96 孔 / 48 孔）
• 标准品 6–8 管 × 0.3–1 mL（常见 6–8 点）
• 生物素化检测抗体、HRP 标记亲和素 / 链霉亲和素
• 20× 浓缩洗涤缓冲液
• TMB 显色底物 A/B、终止液
• 样本稀释液、检测稀释液、封板膜等

实验流程要点

1. 试剂与样本室温平衡；洗涤液稀释至 1×。
2. 加样：标准品与样本按规定体积上样；超上限用指定稀释液稀释后重测。
3. 加生物素化检测抗体，温育并充分洗涤。
4. 加 HRP - 亲和素 / 链霉亲和素，温育并洗涤。
5. 加 TMB 避光显色，适时加终止液，450 nm 读取 OD 值。
6. 以标准品 OD 绘制曲线（4 参数 / 对数拟合），计算样本浓度；注意样本若已稀释，结果需乘以总稀释倍数。

样本处理与保存

• 血清 / 血浆：采集后尽快离心取上清；短期 2–8℃，长期 -20℃/-80℃，避免反复冻融。
• 组织匀浆 / 细胞上清：1000×g 离心 15–20 分钟取上清；保存同上。
• 外观：应清澈透明；如有悬浮物，先离心后再上样。

性能与质量控制

• 灵敏度与检测范围需覆盖目标样本的生理 / 病理区间。
• 特异性：对结构类似物交叉反应应可忽略。
• 重复性：板内与板间 CV 一般 < 10%，用于批内与批间质控。

注意事项

• 严格按规定温度与时间温育；所有试剂使用前恢复室温。
• 充分洗涤并拍干板底残留液体与指纹，避免影响 OD。
• 避免试剂与样本交叉污染；操作与保存避免强光直射（尤其底物 B）。
• 试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断。
• 不同批次的检测范围、灵敏度与显色时间可能不同，结果不可直接跨方法比较。