核心参数一览

• 方法学：双抗体夹心 ELISA；TMB 显色，450 nm 读数。
• 检测范围：3.75–120 ng/mL。
• 灵敏度： 检测浓度 < 0.1 ng/mL。
• 特异性：对结构类似物无明显交叉反应。
• 重复性：板内 CV < 10%；板间 CV < 15%。
• 样本类型：血清、血浆、细胞培养上清等。
• 标本体积：常见上样量 50–100 μL；超上限用配套样本稀释液稀释后重测。
• 标准品：常见 6–8 点（如 120、60、30、15、7.5、3.75 ng/mL），以说明书为准。
• 仪器：酶标仪（450 nm）。
• 保存与效期：2–8℃，6 个月；使用前室温平衡。

试剂盒组分（示例）

• 预包被微孔板（96 孔 / 48 孔）
• 标准品（6–8 管）
• HRP 标记检测抗体或链亲和素 - HRP（依体系而定）
• 20×/30× 洗涤缓冲液、TMB 底物 A/B、终止液
• 样本稀释液、检测稀释液、封板膜等（以说明书为准）

实验流程要点

1. 试剂与样本室温平衡；洗涤缓冲液按倍数稀释至 1×。
2. 加样：标准品与样本各 50–100 μL / 孔；超上限稀释后重测。
3. 加 HRP 标记检测抗体或生物素化二抗 + SA-HRP，按规定温育与洗涤。
4. 加 TMB（A+B 1:1 混合，现配现用）避光显色，适时加终止液，450 nm 读 OD。
5. 以标准品 OD 绘制曲线（4 参数 / 对数拟合），计算样本浓度；结果乘以总稀释倍数。

样本处理与保存

• 血清 / 血浆：常规离心取上清；短期 4℃，长期 -20℃/-80℃，避免反复冻融。
• 细胞培养上清：1000×g 离心 15–20 分钟取上清。
• 注意：不得使用含叠氮钠（NaN3）的样本 / 试剂，因会抑制 HRP。

性能与质量控制

• 灵敏度与检测范围需覆盖目标样本区间。
• 特异性：对结构类似物交叉反应可忽略。
• 重复性：板内 CV < 10%，板间 CV < 15%，用于批内 / 批间质控。
• 剂量反应曲线相关系数 r ≥ 0.9900。
• 回收率：常见 85%–115%（不同样本基质略有差异）。

注意事项

• 严格按温度与时间温育；试剂使用前室温平衡。
• 充分洗涤并拍干板底残留，避免影响 OD。
• 避免试剂与样本交叉污染；底物 B 避光，终止液具腐蚀性，注意防护。
• 试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断。