试剂盒组成（示例，以说明书为准）

• 预包被 ROS 抗体微孔板（96T/48T）
• ROS 标准品（如 0–120 ng/mL 6 点，或冻干复溶后 28–1600 pg/mL）
• HRP 标记 ROS 检测抗体、20×/30× 浓缩洗涤液、样本稀释液、TMB 底物 A/B、终止液、封板膜

检测原理

• 包被抗体捕获样本中的 ROS，HRP 标记抗体形成 “夹心”；TMB 显色后加酸终止，450 nm 测 OD，与 ROS 浓度呈正相关。

样本类型与处理

• 血清：室温 2 h 或 4℃过夜凝固后约 1000×g 15–20 min 取上清；短期 4℃，长期 - 20℃/-80℃分装，避免反复冻融。
• 血浆：EDTA 或肝素抗凝，2–8℃约 1000×g 15 min 取上清；保存同血清。
• 组织匀浆：冰冷 PBS 漂洗后称重，按组织类型选裂解液匀浆，离心取上清。
• 细胞培养上清：1000×g 10–20 min 取上清。

操作要点（简版）

1. 室温平衡试剂；设空白、标准品与样本复孔。
2. 加样（如样本 10 μL + 样本稀释液 40 μL）→37℃孵育 60 min→洗涤 5 次。
3. 加 HRP 结合物→37℃孵育→洗涤。
4. 加 TMB 避光显色（如 15 min）→加终止液→15 min 内 450 nm 读板。
5. 以标准品浓度对 OD 值绘制曲线，计算样本浓度；若先做 n 倍稀释，结果 ×n。

性能指标（典型，以说明书为准）

• 检测范围：常见为 7.5–120 ng/mL 或 28–1600 pg/mL；灵敏度：<1 ng/mL 或 6 pg/mL。
• 特异性：对结构类似物无明显交叉。
• 重复性：板内 CV<10%–15%，板间 CV<15%。
• 线性相关系数：R≥0.990。

保存与有效期

• 2–8℃避光保存，有效期约 6 个月；不同批次不宜混用。

注意事项

• 试剂使用前室温平衡；洗涤充分并拍干，避免残留影响 OD。
• TMB 底物 B 对光敏感，显色需避光；加终止液后尽快读数（如 15 min 内）。
• 若样本 OD 高于标准品上限，先用样本稀释液稀释后重测。