大鼠单胺氧化酶 A(MAOA)ELISA 试剂盒是一种用于体外定量检测大鼠相关生物液体中 MAOA 浓度的工具,以下是其详细介绍:
检测原理:采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗大鼠 MAOA 抗体包被于酶标板上,样品或标准品中的大鼠 MAOA 与包被抗体结合,游离成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠 MAOA 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,形成免疫复合物,再次洗去游离成分。加入显色底物(TMB),TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处测 OD 值,大鼠 MAOA 浓度与 OD450 值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中大鼠 MAOA 的浓度。
试剂盒组成:以 96 孔配置为例,通常包括 96 孔酶标板、塑料膜板盖、标准品(1 瓶 0.6ml)、标准品稀释缓冲液(1 瓶 5ml)、生物素标记的抗 MAOA 抗体(1 瓶 6ml)、亲和链酶素 - HRP(1 瓶 10ml)、洗涤缓冲液(1 瓶 20ml)、底物 A(1 瓶 6.0ml)、底物 B(1 瓶 6.0ml)、终止液(1 瓶 6.0ml)、标本稀释液(1 瓶 6.0ml)。
样本要求:可检测大鼠的血清、血浆、细胞培养上清液、体液和组织匀浆等。标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 - 20℃保存,但应避免反复冻融。
主要技术参数:检测范围为 0.156-10ng/mL,灵敏度为 0.062ng/mL 。
使用方法:大致步骤为在各孔中加入标准品或样品各 100μL,37℃孵育 90 分钟;加入 100μL 生物素化抗体工作液,37℃孵育 60 分钟;洗涤 3 次;加入 100μL 酶结合物工作液,37℃孵育 30 分钟;洗涤 5 次;加入 90μL 底物溶液,37℃孵育 15 分钟左右;加入 50μL 终止液,立即在 450nm 波长处测量 OD 值;根据标准曲线计算样品中 MAOA 的浓度。
储存条件:通常需将所有试剂储存在 2-8℃。