大鼠四氢生物蝶呤(BH4)ELISA 试剂盒是一种用于体外定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中 BH4 含量的工具。以下是其详细介绍:
检测原理:采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠 BH4 捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体,经过温育并 洗涤,用底物 TMB 显色,TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠 BH4 呈正相关,用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中 BH4 的浓度。
试剂盒组成:以 96 孔配置为例,通常包括 96 孔酶标板、板盖、标准品(一般为 72ng/L,0.5ml1 瓶)、标准品稀释液(6ml1 瓶)、HRP 标记的抗 BH4 抗体(6ml1 瓶)、抗体稀释液、洗涤缓冲液(20ml30 倍浓缩液)、TMB 底物(6ml1 瓶)、终止液(6ml1 瓶)、说明书等。
样本要求:可检测大鼠的血清、血浆、组织匀浆、细胞上清液、尿液等多种标本类型。血清和血浆标本需按照常规方法采集和处理,组织标本需制成匀浆,细胞上清液和尿液等需离心去除杂质。所有标本均应避免反复冻融,若不能及时检测,需在 - 20℃或 - 70℃保存。
主要技术参数:检测范围为 3.125-100ng/mL,检测波长为 450nm,试剂盒的有效期通常为 6 个月,需在 2-8℃条件下保存。
操作注意事项:混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡;洗涤过程要充分,不充分的洗涤易造成假阳性;一次加样时间控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样;每次测定时需同时做标准曲线,且 做复孔;如标本中待测物质含量过高,需先稀释后再测定,计算时需乘以稀释倍数;在配制标准品、检测溶液工作液时,应以相应的稀释液配制,不能混淆;底物需避光保存。