大鼠 CD68 分子(CD68)ELISA 检测试剂盒是一种用于检测大鼠样本中 CD68 分子含量的工具,在免疫学、病理学等研究领域应用广泛。以下是其详细介绍:
检测原理:采用双抗体夹心法。将特异性抗大鼠 CD68 分子的单克隆抗体(捕获抗体)包被于 96 孔微孔板中,加入待检测的大鼠样本和 CD68 分子标准品,使样本中的 CD68 分子以及标准品中的 CD68 分子与固相在微孔板上的捕获抗体发生特异性免疫结合,形成 “捕获抗体 - CD68 分子” 复合物。孵育结束后,洗涤微孔板,去除未结合的杂质和游离的 CD68 分子。然后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗大鼠 CD68 分子单克隆抗体(检测抗体),检测抗体会与 “捕获抗体 - CD68 分子” 复合物中的 CD68 分子特异性结合,形成 “捕获抗体 - CD68 分子 - HRP 标记检测抗体” 的双抗体夹心复合物。再次洗涤后,加入 TMB 底物显色,TMB 在 HRP 的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 CD68 分子含量呈正相关,用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(O.D. 值),通过与标准曲线对比,即可计算出样品中 CD68 分子的浓度。
试剂盒组成:通常包括预包被特异性抗体的 96 孔微孔板、CD68 分子标准品、标准品稀释液、HRP 标记的检测抗体、检测抗体稀释液、TMB 底物、终止液、洗涤液(一般为高浓度浓缩液,使用前需稀释)以及说明书等。
样本类型:可检测大鼠的血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液等样本。
样本处理:血清样本需将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清;血浆样本需用枸橼酸盐或肝素作为抗凝剂采集标本,并在采集后的 30 分钟内于 2 - 8℃、1000×g 离心 15 分钟,取上清;组织匀浆、细胞培养上清液等其他生物标本一般 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可。若样本收集后不及时检测,可将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存,但应避免反复冻融。
操作步骤:大致包括将样本和标准品加入预包被抗体的酶标板孔中,在适宜温度(如 37℃)下孵育一定时间;洗涤酶标板;加入 HRP 标记的检测抗体,再次孵育后洗涤;加入 TMB 底物显色,在 37℃避光条件下孵育一段时间;加入终止液终止反应; 用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度值,计算样品浓度。
检测范围: 0.781ng/mL - 50ng/mL , 检测浓度可达 0.469ng/mL 。