检测原理：采用双抗体夹心法。将特异性抗大鼠 CA19-9 的抗体包被在 96 孔微孔板上，加入待检测的大鼠样本和 CA19-9 标准品，使样本与标准品中的 CA19-9 与包被抗体结合，形成抗原 - 抗体复合物。孵育洗涤后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗大鼠 CA19-9 抗体，该抗体与上述复合物中的 CA19-9 结合，形成双抗体夹心结构。再次洗涤去除未结合的标记抗体后，加入 TMB 底物显色，TMB 在 HRP 催化下显色，颜色深浅与样本中 CA19-9 含量呈正相关，通过酶标仪测定吸光度值，与标准曲线对比即可算出样品中 CA19-9 的浓度。
试剂盒组成：通常包括预包被抗体的 96 孔微孔板、CA19-9 标准品、标准品稀释液、检测试剂 A（HRP 标记的抗 CA19-9 抗体等）、检测试剂 B、TMB 底物、终止液、30× 浓缩洗涤缓冲液以及说明书等。
样本类型：常见的有大鼠的血清、血浆、组织匀浆及相关体液等。
样本处理：血清样本需将全血标本室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清；血浆样本用枸橼酸盐或肝素作为抗凝剂采集标本，并在采集后的 30 分钟内于 2-8℃、1000×g 离心 15 分钟，取上清；组织匀浆等其它生物标本一般 1000×g 离心 20 分钟，取上清。样本若不立即检测，可将上清置于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤：先将试剂盒各组分和样本在室温平衡 30 分钟左右。取出所需的微孔板条，设置标准品孔和样本孔，加入不同浓度的标准品和待测样品。然后进行孵育、洗涤操作，加入检测试剂 A，孵育洗涤后再加检测试剂 B，再次孵育洗涤，之后加入 TMB 底物显色， 加入终止液终止反应，用酶标仪在 450nm 波长处测定各孔的吸光度值，根据标准曲线计算样品中 CA19-9 的浓度。
检测范围： 2.5U/L-80U/L ， 检测浓度小于 0.1U/L。