产品货号：DM-Cat6793

产品规格：48/96T

牛附睾蛋白 4（HE4）酶联免疫试剂盒是一种用于体外定量检测牛血清、血浆、组织匀浆等样本中 HE4 含量的工具。以下是其详细介绍：
检测原理：采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。用抗牛 HE4 抗体包被于酶标板上，实验时样品中的牛 HE4 会与包被抗体结合，再依次加入生物素化的抗牛 HE4 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成免疫复合物，游离成分被洗去。加入显色底物 TMB，TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450nm 波长处测 OD 值，HE4 浓度与 OD 值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中 HE4 的浓度。
试剂盒组成：通常包括酶联板（96 孔或 48 孔）、牛 HE4 标准品（冻干品）、样品稀释液、生物素标记的抗牛 HE4 抗体、辣根过氧化物酶标记的亲和素、洗涤缓冲液、TMB 底物、终止液等。
标本要求：血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆等均可作为检测标本。血清采集时要使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激，血液收集后 3000 转离心 10 分钟分离血清和红细胞；血浆可用 EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000 转离心 30 分钟取上清；细胞上清液 3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物；组织匀浆是将组织加入适量生理盐水捣碎，1000×g 离心 10 分钟，取上清液。样本收集后若在 1 周内检测可保存于 2-8℃，若不能及时检测，应按一次用量分装，冻存于 - 20℃（1 个月内检测）或 - 80℃（3 个月内检测），避免反复冻融，检测前冷冻样本应缓慢融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物，室温混匀后使用。
操作步骤：从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃；设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔不加样，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；随后在标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min；弃去孔内液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，重复洗板 5 次；所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min；所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
计算方法：以标准品的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在 Excel 工作表中绘制出标准曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
检测范围和灵敏度：检测范围在 15.6-1000pg/mL ，灵敏度可达到≤5pg/mL。
保存条件及有效期：试剂盒一般保存于 2-8℃，有效期通常为 6 个月左右。

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