产品货号：DM-Cat6796

产品规格：48/96T

牛活性氧（ROS）酶联免疫试剂盒是一种用于体外定量检测牛血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中活性氧含量的工具，以下是其详细介绍：
检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛活性氧（ROS）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体，经过温育并 洗涤。用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛活性氧（ROS）呈正相关，用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
试剂盒组成：酶标包被板：预先包被有 ROS 捕获抗体的微孔板。
标准品：已知浓度的 ROS 标准溶液，用于绘制标准曲线。
酶标试剂：HRP 标记的检测抗体，与 ROS 特异性结合。
显色剂 A 和显色剂 B：通常 A 液为无色透明液体，B 液为无色或淡黄色透明液体，两者混合后在 HRP 的作用下发生显色反应。
终止液：如硫酸溶液，用于终止显色反应。
洗涤液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。
说明书：包含试剂盒的使用方法、注意事项、性能指标等详细信息。
标本要求：血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000 转离心 30 分钟取上清。
细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎，3000 转离心 10 分钟取上清。
保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于 - 20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤：标准品的稀释：试剂盒一般提供原倍标准品，用户可根据说明书进行梯度稀释。
加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl，样品最终稀释度为 5 倍。
温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水按规定倍数稀释后备用。
洗涤：弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
温育：同步骤 3。
洗涤：同步骤 5。
显色：每孔先加入显色剂 A 50μl，再加入显色剂 B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 分钟。
终止：每孔加终止液 50μl，终止反应。
测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值），测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
计算方法：以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
保存条件及有效期：试剂盒保存于 2-8℃，有效期一般为 6 个月。

上海笃玛生物科技有限公司