产品货号：DM-Cat6792

产品规格：48/96T

牛 Ki-67 蛋白（Ki67P）酶联免疫试剂盒是一种用于体外定量检测牛血清、血浆、细胞培养上清液或组织中 Ki-67 蛋白浓度的工具，以下是其详细介绍：
检测原理：通常采用双抗体夹心法。将特异性抗牛 Ki-67 单克隆抗体包被于固相载体，加入待检样本，使样本中的 Ki-67 蛋白与固相抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤后，加入生物素标记的多克隆抗体，使其与固相抗原复合物上的 Ki-67 蛋白结合。再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，亲和素与生物素特异性结合。 加入底物 TMB 显色，TMB 在 HRP 的催化下转化为蓝色，在酸的作用下变为黄色，颜色深浅与样本中 Ki-67 蛋白的量正相关，通过酶标仪测定 450nm 波长处的 OD 值，即可计算出样本中 Ki-67 蛋白的浓度。
试剂盒组成：一般包括预包被板（96T 或 48T）、酶标记抗体（如 HRP 标记的 IgG，通常为 30 倍浓缩）、标准品、EIA 缓冲液（含 1% BSA、0.05% 吐温 20 的 BPS）、标记抗体稀释液、显色剂（TMB 底物液）、终止液（如 1N 硫酸）、浓缩洗涤液（40 倍浓缩，含 1% BSA、0.05% 吐温 20 的 BPS）。
样本要求：血清、血浆、细胞培养上清液或组织等均可作为检测样本。血清标本需全血标本于室温放置 2 小时或 4℃过夜后，1000g 离心 20 分钟，取上清检测；血浆可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2-8℃1000g 离心 20 分钟，取上清检测；组织匀浆需用预冷的 PBS 冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎，按一定比例加入 PBS，于冰上充分研磨，可进一步超声破碎或反复冻融，5000×g 离心 5-10 分钟，取上清检测。样本采集后若不能马上进行试验，可将标本放于 - 20℃或 - 80℃保存，但应避免反复冻融。
检测范围和灵敏度：检测范围为 0.313-20ng/ml，灵敏度为 0.188ng/ml。
操作步骤：试剂盒从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，样本孔中加入待测样本 50μL，空白孔不加。
除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次。
每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
注意事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用；浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶；各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性；请每次测定的同时做标准曲线， 做复孔；封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染；底物请避光保存；严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

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