产品货号：DM-Cat6789

产品规格：48/96T

牛 DNA 甲基转移酶 3B（DNMT3B）酶联免疫试剂盒是一种用于体外定量检测牛血清、血浆、组织匀浆等生物样本中 DNMT3B 含量的工具，以下是其详细介绍：
检测原理：采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗牛 DNMT3B 抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入牛 DNMT3B 标准品和待测样本，再加入生物素标记抗体，经过温育与充分洗涤后，再加入 HRP 偶联的亲和素，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体 - 抗原 - 生物素标记抗体 - 亲和素酶的夹心复合物。加 TMB 显色液，产生蓝色产物，在终止液作用下，最终转化为黄色，在酶标仪 450nm 波长上测定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品中牛 DNMT3B 的浓度正相关，通过标准曲线可计算出样本中 DNMT3B 的浓度。
试剂盒组成：通常包括预包被有抗牛 DNMT3B 抗体的微孔板、DNMT3B 标准品、生物素标记的检测抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素、洗涤缓冲液、TMB 底物液、终止液等。
样本要求：血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆等均可作为检测样本。血清采集时需使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激，血液收集后 3000 转离心 10 分钟分离血清和红细胞；血浆可用 EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000 转离心 30 分钟取上清；细胞上清液 3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物；组织匀浆是将组织加入适量生理盐水捣碎后，3000 转离心 10 分钟取上清。若样本收集后不及时检测，应按一次用量分装，冻存于 - 20℃，避免反复冻融，使用时在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
检测范围和灵敏度：检测范围一般为 0.05-25ng/mL， 检测浓度小于 0.1ng/mL。
操作步骤：试剂盒从 2-8℃冰箱取出后，室温平衡 20 分钟。
设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；样本孔加待测样本 50μL（若按说明书操作，样本已稀释 5 倍，最终结果需乘以 5 才是样本实际浓度）。
除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入 HRP 标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃温育 60 分钟。
弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1 分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次。
每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15 分钟。
每孔加入终止液 50μL，15 分钟内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
注意事项：试剂盒应保存在 2-8℃，使用前需在室温平衡；从冰箱取出的浓缩洗涤液若有结晶，需水浴加热使结晶完全溶解后再使用；实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封低温干燥保存；严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作；所有液体组分使用前需充分摇匀。

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