产品货号：DM-Cat6782

产品规格：48/96T

牛缺血修饰白蛋白（IMA）酶联免疫试剂盒是一种用于定量检测牛血清、血浆等生物样本中缺血修饰白蛋白含量的科研工具，以下是详细介绍：
基本信息

规格： 48T 和 96T 两种规格，48T 指试剂盒可进行 48 次检测，96T 则可进行 96 次检测。
检测方法：基于酶联免疫吸附测定法，一般采用双抗体夹心模式。
检测范围：检测范围3.75U/mL - 120U/mL 。
灵敏度试剂盒的灵敏度可达 0.1U/mL 或更低，能够精准检测到样本中较低水平的 IMA。
主要组成成分酶标包被板：通常为 96 孔板，已预包被针对牛 IMA 的特异性抗体。
标准品：一般为 2 瓶冻干品，临用前需用样品稀释液溶解并进行倍比稀释，以绘制标准曲线。
样品稀释液：用于稀释待测样本及溶解标准品。
生物素标记抗体及稀释液：生物素标记的 IMA 特异性抗体及其稀释液。
辣根过氧化物酶标记亲和素及稀释液：辣根过氧化物酶标记的亲和素及其稀释液，与生物素标记抗体相互作用实现酶促显色。
底物溶液：多采用 TMB 底物，可在酶催化下显色。
浓洗涤液：用于洗涤酶标板，去除未结合的物质，一般使用时需用蒸馏水稀释。
终止液：通常为 2N H?SO?，用于终止酶促反应。
适用样本类型：可检测血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、细胞裂解液、腹腔液、尿液、脑髓液、唾液等多种样本。
操作步骤准备：试剂盒从冰箱取出后需在室温下复温 30 分钟，同时将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成工作液。
加样：设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，标准品孔加标准品 50μL；待测样本孔先加样本 10μL，再加样本稀释液 40μL，空白对照孔不加样。
温育：将酶标板置于 37℃水浴锅或恒温箱温育 30 分钟。
洗板：弃去孔内液体并拍干，每孔加满洗涤液，静置 1 分钟后甩去，重复洗板 4 次。
加酶标工作液：每孔加 50μL 酶标工作液，空白对照孔不加，再于 37℃温育 30 分钟。
再次洗板：重复步骤 4 的洗板操作。
显色：每孔先加显色剂 A 液 50μL，再加显色剂 B 液 50μL，37℃避光显色 15 分钟。
终止：每孔加终止液 50μL，反应液颜色会由蓝色变为黄色。
测定：在终止反应后的 15 分钟内，使用酶标仪在 450nm 波长处测量各孔的吸光值（OD 值）。
计算：依据标准品的浓度和 OD 值绘制标准曲线，再根据样品的 OD 值从标准曲线上计算出样品的浓度，实际浓度为测定浓度乘以稀释倍数。
性能特点精密度：预包被微孔板的批内和批间变异系数通常均小于 10%，可保证实验结果的重复性。
特异性：经过严格交叉反应和干扰测试，试剂盒中的抗体仅对牛缺血修饰白蛋白有特异性识别能力，不与其他结构类似的可溶性物质发生明显交叉反应。

双抗夹心法是 ELISA 中最常用的定量检测技术，核心是通过两种特异性抗体 “捕获 + 检测” 目标抗原，实现高灵敏度、高特异性的定量分析。

显色与定量：加入酶底物（如 TMB、OPD），酶（常用 HRP、AP）催化底物显色，显色强度与样本中抗原浓度正相关。加入终止液终止反应后，用酶标仪检测吸光度，通过标准曲线计算样本中抗原的具体浓度。

二、关键特点
特异性高：两种抗体均针对目标抗原，且识别不同表位，交叉反应风险低，能有效排除杂蛋白干扰。
灵敏度强：夹心结构可放大信号，酶催化反应进一步增强检测信号，能检出低至 pg/mL 或 ng/mL 级别的抗原。
适用范围广：仅适用于具有两个及以上抗原表位的大分子抗原（如蛋白质、多肽、病毒颗粒等），无法检测小分子抗原（无足够表位结合两种抗体）。
定量准确：标准曲线线性关系良好，可通过梯度浓度标准品精准推算样本中抗原浓度，重复性佳（板内 / 板间 CV 通常＜10%-15%）。

三、核心操作流程
包被：用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液 pH9.6）稀释捕获抗体，加入酶标板，4℃孵育 12-16 小时或 37℃孵育 2 小时，洗涤 3-5 次。

封闭：加入封闭液（如 5% 脱脂奶粉、BSA），37℃孵育 1-2 小时，封闭未结合抗体的空白位点，洗涤去除多余封闭液。

加样反应：加入梯度浓度标准品和待测样本，37℃孵育 1-2 小时，让抗原与捕获抗体充分结合，洗涤去除未结合抗原。

加检测抗体：加入酶标记的检测抗体，37℃孵育 1 小时，洗涤去除游离检测抗体。

显色：加入底物溶液，37℃避光孵育 10-30 分钟（根据试剂盒要求调整），观察显色情况。

终止与检测：加入终止液（如硫酸溶液），15 分钟内用酶标仪在对应波长（如 TMB 底物检测波长 450nm）读取吸光度。

结果计算：以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，代入样本吸光度值计算抗原浓度。

四、关键注意事项
抗体选择：捕获抗体与检测抗体需配对使用，确保识别抗原的不同表位，避免交叉竞争影响结合。

洗涤步骤：每步反应后需充分洗涤（用 PBST 缓冲液），避免未结合物质残留导致背景偏高或假阳性。

反应条件控制：严格控制孵育温度、时间，底物显色需避光，终止后及时检测，避免显色过度或褪色。

试剂质量：抗体、酶标记物、底物需在有效期内储存使用，避免因试剂失效影响检测结果。

选择 ELISA 试剂盒需围绕 “检测目标、样本类型、实验需求、产品性能” 四大核心，兼顾准确性、适用性和性价比，避免盲目选型。

锁定检测目标：精准确认目标抗原 / 抗体（如大鼠 PDCD1LG1、人 IL-6），明确物种（人 / 大鼠 / 小鼠等）和检测类型（定量 / 定性），避免物种或指标错配。

匹配样本类型：根据实验室样本（血清 / 血浆 / 组织匀浆 / 细胞上清等）选择，优先选明确标注 “适配该样本类型” 的试剂盒，部分试剂盒需特殊样本预处理，需提前确认操作可行性。

明确检测范围与灵敏度：按样本中目标物浓度估算，试剂盒检测范围需覆盖样本预期浓度（如样本浓度约 10-100ng/mL，选择检测范围 5-200ng/mL 的试剂盒），灵敏度需低于样本 预期浓度，避免无法检出或超出量程。

特异性：优先选标注 “无交叉反应” 或 “交叉反应率＜5%” 的试剂盒，确保不与样本中其他类似物质发生干扰，尤其检测复杂样本（如组织匀浆）时需重点关注。

重复性：查看产品说明中板内 / 板间变异系数（CV）， 试剂盒板内 CV＜10%、板间 CV＜15%，保证实验结果稳定可靠。

线性关系：标准曲线相关系数 R2≥0.99 为合格，线性越好，定量结果越精准，避免因线性不佳导致浓度推算误差。

方法学类型：双抗夹心法（适用于大分子抗原，特异性高、灵敏度强）、间接法（适用于小分子抗原或抗体检测）、竞争法（适用于小分子或半抗原），按检测目标特性选择。

实验周期与操作复杂度：快速检测需求可选 “一步法” 或 “短孵育时间（如 30 分钟 / 孔）” 的试剂盒；新手或高通量检测需选操作流程简单、步骤少的产品，减少人为误差。

合规与溯源需求：临床检验、药物研发等合规场景，需选带 CE、FDA 认证或符合 ISO 15189 标准的试剂盒；科研场景可选择性价比高的科研级产品，但需确保性能参数明确。

试剂稳定性与储存条件：优先选有效期≥6 个月、储存条件宽松（如 2-8℃避光，无需 - 20℃冷冻）的试剂盒，避免因试剂易失效或储存不便影响使用。

成本预算：在满足性能要求的前提下，平衡单价与单次检测成本（部分试剂盒可拆分使用，适合小样本量实验室），避免过度追求高价产品或因 导致结果不可靠。

试剂盒组成完整性：确认包含酶标板、标准品、抗体、底物、终止液、洗涤液等核心组分，是否需额外自备辅助试剂（如封闭液），避免后续采购麻烦。

品牌与用户口碑：选择市场认可度高、有明确技术支持的品牌，可参考同领域文献中常用试剂盒型号，或咨询同行实验室推荐，减少踩坑风险。

售后支持：优先选提供技术咨询、异常结果排查指导的品牌，部分厂家可提供试用装，适合 使用该试剂盒的实验室验证性能。

上海笃玛生物科技有限公司