产品货号：DM-Cat6779

产品规格：48/96T

牛 25 羟基维生素 D（25 (OH) D）酶联免疫试剂盒是用于检测牛血清、血浆等样本中 25 (OH) D 含量的科研工具，具体介绍如下：
基本信息

规格：48/96T。
检测方法：通常采用竞争酶联免疫法。
检测波长：通过酶标仪在 450nm 波长附近读取吸光值以进行定量分析。
主要组成成分包被板：通常为 96 孔可拆板，包被有维生素 D 结合蛋白（VDBP）。
标准品：通常有 6 瓶左右，浓度梯度常为 0-4-10-25-60-130pg/ml 等，且经 NIST SRM 校准。
变性缓冲液：1 瓶，一般为 10ml 装，用于预处理样本，释放结合态的 25 (OH) D。
中和缓冲液：1 瓶，约 25ml，在变性处理后用于中和反应体系。
酶联物：包含生物素化的 25 (OH) D，通常为 7ml 装。
酶联复合物：一般是链霉亲和素 - 过氧化物酶溶液，约 7ml。
底物液：多采用 TMB 底物，一般为 25ml。
终止液：通常为含 0.5M 硫酸的溶液，约 14ml。
洗涤液：多为 40X 等浓缩倍数，需稀释使用。
适用样本类型：主要适用于牛的血清、血浆样本。
操作步骤预处理：在玻璃瓶中，每孔加入 25μl 标准品、质控品或样本，再加入 50μl 变性缓冲液，37℃孵育 30 分钟，接着加入 200μl 中和缓冲液。
加酶联物与孵育：在中和后的溶液中加入 100μl 酶联物与酶联复合物混合液，混匀 10 秒，取 150μl 加入包被板孔内，37℃孵育 60 分钟。
洗板：弃去孔内液体，每孔加 300μl 洗涤液，洗板 4 次，然后在吸水纸上拍干。
显色与终止：每孔加 150μl 底物液，室温避光孵育 15 分钟，再加入 100μl 终止液。
测定与计算：在加终止液后的 10 分钟内，用酶标仪读取 450nm 处的 OD 值，再根据标准曲线计算样本中 25 (OH) D 的浓度。
性能特点灵敏度：部分试剂盒的灵敏度可达到 0.5ng/mL 或更低，能够精准检测出样本中较低含量的 25 (OH) D。
精密度：批内和批间变异系数一般可控制在 8% 以内，重复性和稳定性较高。
特异性：试剂盒主要对 25 (OH) D 有响应，与牛体内其他维生素及细胞因子等无明显交叉反应。

如何判断ELISA实验数据的可靠性？

ELISA 实验数据可靠性需通过 “对照验证、重复性分析、曲线拟合质量、样本检测合理性” 四大维度综合判断，核心是满足预设质控标准。
一、对照结果是否符合标准
空白对照：吸光度（A 值）需低于试剂盒规定阈值（通常＜0.1 或 0.2A），且无明显显色，证明无试剂污染或杂光干扰。
阴性对照：A 值应接近空白对照，与阳性对照的比值需满足试剂盒要求（通常阴性 / 阳性＜0.3），无假阳性信号。
阳性对照 / 校准品：A 值需落在标准曲线线性范围内，检测浓度与已知浓度的偏差≤15%（中高浓度）、≤20%（低浓度），证明试剂活性正常。
加样回收实验：向已知浓度的样本中加入标准品，回收率需在 85%-115% 之间，说明样本无明显基质效应。
二、重复性是否达标
平行孔重复性：同一标准品或样本的 3 个以上平行孔 A 值变异系数（CV）≤10%，证明操作过程稳定，无偶然误差。
板内 / 板间重复性：板内不同孔位的标准品检测 CV≤10%，不同批次实验（同试剂盒）的标准曲线关键参数（如 EC50、斜率）偏差≤15%，确保数据可复现。
人员 / 设备重复性：不同操作人员或不同酶标仪检测同一样本，结果偏差≤10%，排除人为或设备差异导致的误差。
三、标准曲线拟合质量是否合格
相关系数（R2）：线性回归模型 R2≥0.99，四参数 logistic 回归（4-PL）R2≥0.995，证明浓度与 A 值的相关性良好。
残差分布：残差（实测值与预测值的差值）均匀分布在 0 附近，无明显趋势性偏差，避免模型拟合不当。
曲线覆盖范围：标准品低浓度点 A 值需明显高于空白对照（信噪比≥3），高浓度点无平台期过早出现，确保样本浓度在曲线有效范围内。
四、样本检测结果是否合理
浓度范围合理性：样本浓度需落在标准曲线线性区间内，超出上限需稀释后重测，低于下限需注明 “低于检测限”，避免外推计算导致误差。
稀释线性：稀释后的样本浓度与稀释倍数呈线性关系（偏差≤15%），证明样本无抑制物或干扰物质。
生物学合理性：结果需符合已知生物学规律，若出现明显异常，需排查实验流程或样本质量。

选择 ELISA 试剂盒需围绕 “检测目标、样本类型、实验需求、产品性能” 四大核心，兼顾准确性、适用性和性价比，避免盲目选型。

锁定检测目标：精准确认目标抗原 / 抗体（如大鼠 PDCD1LG1、人 IL-6），明确物种（人 / 大鼠 / 小鼠等）和检测类型（定量 / 定性），避免物种或指标错配。

匹配样本类型：根据实验室样本（血清 / 血浆 / 组织匀浆 / 细胞上清等）选择，优先选明确标注 “适配该样本类型” 的试剂盒，部分试剂盒需特殊样本预处理，需提前确认操作可行性。

明确检测范围与灵敏度：按样本中目标物浓度估算，试剂盒检测范围需覆盖样本预期浓度（如样本浓度约 10-100ng/mL，选择检测范围 5-200ng/mL 的试剂盒），灵敏度需低于样本 预期浓度，避免无法检出或超出量程。

特异性：优先选标注 “无交叉反应” 或 “交叉反应率＜5%” 的试剂盒，确保不与样本中其他类似物质发生干扰，尤其检测复杂样本（如组织匀浆）时需重点关注。

重复性：查看产品说明中板内 / 板间变异系数（CV）， 试剂盒板内 CV＜10%、板间 CV＜15%，保证实验结果稳定可靠。

线性关系：标准曲线相关系数 R2≥0.99 为合格，线性越好，定量结果越精准，避免因线性不佳导致浓度推算误差。

方法学类型：双抗夹心法（适用于大分子抗原，特异性高、灵敏度强）、间接法（适用于小分子抗原或抗体检测）、竞争法（适用于小分子或半抗原），按检测目标特性选择。

实验周期与操作复杂度：快速检测需求可选 “一步法” 或 “短孵育时间（如 30 分钟 / 孔）” 的试剂盒；新手或高通量检测需选操作流程简单、步骤少的产品，减少人为误差。

合规与溯源需求：临床检验、药物研发等合规场景，需选带 CE、FDA 认证或符合 ISO 15189 标准的试剂盒；科研场景可选择性价比高的科研级产品，但需确保性能参数明确。

试剂稳定性与储存条件：优先选有效期≥6 个月、储存条件宽松（如 2-8℃避光，无需 - 20℃冷冻）的试剂盒，避免因试剂易失效或储存不便影响使用。

成本预算：在满足性能要求的前提下，平衡单价与单次检测成本（部分试剂盒可拆分使用，适合小样本量实验室），避免过度追求高价产品或因 导致结果不可靠。

试剂盒组成完整性：确认包含酶标板、标准品、抗体、底物、终止液、洗涤液等核心组分，是否需额外自备辅助试剂（如封闭液），避免后续采购麻烦。

品牌与用户口碑：选择市场认可度高、有明确技术支持的品牌，可参考同领域文献中常用试剂盒型号，或咨询同行实验室推荐，减少踩坑风险。

售后支持：优先选提供技术咨询、异常结果排查指导的品牌，部分厂家可提供试用装，适合 使用该试剂盒的实验室验证性能。

上海笃玛生物科技有限公司