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| 产地 | 上海 |
| 保存条件 | 2-8° |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-Cat6778 |
| 用途 | 科研实验 |
| 检测方法 | 双抗夹心法 |
| 保质期 | 6个月 |
| 适应物种 | 牛 |
| 检测限 | 电询 |
| 数量 | 999 |
| 包装规格 | 48/96T |
| 标记物 | 电询 |
| 样本 | 电询 |
| 应用 | 科研实验 |
| 是否进口 | 否 |
产品货号:DM-Cat6778
产品规格:48/96T
牛膜攻击复合物(MAC)酶联免疫试剂盒是科研中用于定量检测牛血清、血浆、组织匀浆等样本中 MAC 含量的工具,以下是具体介绍:
基本信息
检测方法:通常采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。
检测波长:一般在 450nm 波长处用酶标仪进行吸光值测定。
保存条件:通常需在 2-8℃环境下保存,若长期不用,部分试剂可能需 -20℃保存,有效期通常为 6 个月。
主要组成成分酶标包被板:一般为 96 孔可拆卸板,已预包被针对牛 MAC 的特异性抗体。
标准品:一般为冻干品,有 2-6 瓶不等,临用前需用样品稀释液溶解并进行倍比稀释,用于绘制标准曲线。
检测抗体:通常为辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗牛 MAC 抗体。
样品稀释液:用于稀释待测的牛血清、血浆、组织匀浆等生物样本,也可用于溶解标准品。
洗涤液:多为浓缩型,如 20X 或 40X 浓缩洗涤液,使用时需要按要求用蒸馏水稀释成工作液,用于洗板去除未结合的物质。
底物溶液:常采用 TMB 底物,能在 HRP 的催化下显色。
终止液:通常为硫酸溶液,加至反应孔中可终止酶促反应。
操作步骤平衡与准备:试剂盒从冰箱取出后室温平衡 20 分钟左右,将浓缩洗涤液稀释成工作液。
加样:设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,标准品孔加入不同浓度的标准品 50μL,样本孔加入适量待测样本,空白对照孔不加。
加检测抗体:除空白孔外,标准品孔和样本孔每孔加入 100μL HRP 标记的检测抗体,用封板膜封住反应孔,37℃温育 60 分钟。
洗板:弃去孔内液体并拍干,每孔加满洗涤液,静置 1 分钟左右后甩去,重复 5 次。
性能特点灵敏度:可检测到低至 pg/mL 级别的 MAC 含量,能精准检测样本中较低水平的 MAC。
精密度:批内变异系数一般 CV<10%,批间变异系数 CV<12%,实验结果重复性好。
特异性:试剂盒的抗体对牛 MAC 有较强的特异性识别能力,与牛体内其他补体蛋白、细胞因子等物质无明显交叉反应。
双抗夹心法是 ELISA 中最常用的定量检测技术,核心是通过两种特异性抗体 “捕获 + 检测” 目标抗原,实现高灵敏度、高特异性的定量分析。
ELISA 实验数据可靠性需通过 “对照验证、重复性分析、曲线拟合质量、样本检测合理性” 四大维度综合判断,核心是满足预设质控标准。
一、对照结果是否符合标准
空白对照:吸光度(A 值)需低于试剂盒规定阈值(通常<0.1 或 0.2A),且无明显显色,证明无试剂污染或杂光干扰。
阴性对照:A 值应接近空白对照,与阳性对照的比值需满足试剂盒要求(通常阴性 / 阳性<0.3),无假阳性信号。
阳性对照 / 校准品:A 值需落在标准曲线线性范围内,检测浓度与已知浓度的偏差≤15%(中高浓度)、≤20%(低浓度),证明试剂活性正常。
加样回收实验:向已知浓度的样本中加入标准品,回收率需在 85%-115% 之间,说明样本无明显基质效应。
二、重复性是否达标
平行孔重复性:同一标准品或样本的 3 个以上平行孔 A 值变异系数(CV)≤10%,证明操作过程稳定,无偶然误差。
板内 / 板间重复性:板内不同孔位的标准品检测 CV≤10%,不同批次实验(同试剂盒)的标准曲线关键参数(如 EC50、斜率)偏差≤15%,确保数据可复现。
人员 / 设备重复性:不同操作人员或不同酶标仪检测同一样本,结果偏差≤10%,排除人为或设备差异导致的误差。
三、标准曲线拟合质量是否合格
相关系数(R2):线性回归模型 R2≥0.99,四参数 logistic 回归(4-PL)R2≥0.995,证明浓度与 A 值的相关性良好。
残差分布:残差(实测值与预测值的差值)均匀分布在 0 附近,无明显趋势性偏差,避免模型拟合不当。
曲线覆盖范围:标准品低浓度点 A 值需明显高于空白对照(信噪比≥3),高浓度点无平台期过早出现,确保样本浓度在曲线有效范围内。
选择 ELISA 试剂盒需围绕 “检测目标、样本类型、实验需求、产品性能” 四大核心,兼顾准确性、适用性和性价比,避免盲目选型。
锁定检测目标:精准确认目标抗原 / 抗体(如大鼠 PDCD1LG1、人 IL-6),明确物种(人 / 大鼠 / 小鼠等)和检测类型(定量 / 定性),避免物种或指标错配。
匹配样本类型:根据实验室样本(血清 / 血浆 / 组织匀浆 / 细胞上清等)选择,优先选明确标注 “适配该样本类型” 的试剂盒,部分试剂盒需特殊样本预处理,需提前确认操作可行性。
明确检测范围与灵敏度:按样本中目标物浓度估算,试剂盒检测范围需覆盖样本预期浓度(如样本浓度约 10-100ng/mL,选择检测范围 5-200ng/mL 的试剂盒),灵敏度需低于样本 预期浓度,避免无法检出或超出量程。
特异性:优先选标注 “无交叉反应” 或 “交叉反应率<5%” 的试剂盒,确保不与样本中其他类似物质发生干扰,尤其检测复杂样本(如组织匀浆)时需重点关注。
重复性:查看产品说明中板内 / 板间变异系数(CV), 试剂盒板内 CV<10%、板间 CV<15%,保证实验结果稳定可靠。
线性关系:标准曲线相关系数 R2≥0.99 为合格,线性越好,定量结果越精准,避免因线性不佳导致浓度推算误差。
方法学类型:双抗夹心法(适用于大分子抗原,特异性高、灵敏度强)、间接法(适用于小分子抗原或抗体检测)、竞争法(适用于小分子或半抗原),按检测目标特性选择。
实验周期与操作复杂度:快速检测需求可选 “一步法” 或 “短孵育时间(如 30 分钟 / 孔)” 的试剂盒;新手或高通量检测需选操作流程简单、步骤少的产品,减少人为误差。
合规与溯源需求:临床检验、药物研发等合规场景,需选带 CE、FDA 认证或符合 ISO 15189 标准的试剂盒;科研场景可选择性价比高的科研级产品,但需确保性能参数明确。
试剂稳定性与储存条件:优先选有效期≥6 个月、储存条件宽松(如 2-8℃避光,无需 - 20℃冷冻)的试剂盒,避免因试剂易失效或储存不便影响使用。
成本预算:在满足性能要求的前提下,平衡单价与单次检测成本(部分试剂盒可拆分使用,适合小样本量实验室),避免过度追求高价产品或因 导致结果不可靠。
试剂盒组成完整性:确认包含酶标板、标准品、抗体、底物、终止液、洗涤液等核心组分,是否需额外自备辅助试剂(如封闭液),避免后续采购麻烦。
品牌与用户口碑:选择市场认可度高、有明确技术支持的品牌,可参考同领域文献中常用试剂盒型号,或咨询同行实验室推荐,减少踩坑风险。
售后支持:优先选提供技术咨询、异常结果排查指导的品牌,部分厂家可提供试用装,适合 使用该试剂盒的实验室验证性能。
上海笃玛生物科技有限公司