产品货号：DM-Cat6775

产品规格：48/96T

牛巢蛋白 2（NID2）ELISA 检测试剂盒是一种用于科研检测牛体内 NID2 含量的工具，以下是相关介绍：
检测原理：通常采用双抗体夹心 ELISA 法。先将针对牛 NID2 的特异性抗体预包被在 96 孔板上，加入待检样本与标准品，若样本中有 NID2，其会与包被抗体结合，再加入生物素标记的 NID2 检测抗体，形成抗体 - 抗原 - 生物素抗体复合物，之后加入亲和素 - 辣根过氧化物酶结合物，通过 TMB 底物显色，颜色深浅与样本中 NID2 含量呈正比。
样本要求：适用的样本类型通常为血清、血浆以及其他相关生物体液。
试剂盒组成：一般包含 NID2 包被微孔板（96 孔或 48 孔）、NID2 冻干标准品、100X 生物素标记 NID2 检测抗体、100X 亲和素 - HRP 结合物、样本稀释液、检测抗体稀释液、结合物稀释液、25X 洗涤缓冲液、TMB 底物和终止液等。
操作要点：使用前需恢复试剂盒至室温，样本需澄清无杂质。加样要准确，依次完成孵育、洗板等步骤， 在酶标仪 450nm 波长处读取吸光度值，依据标准曲线计算出样品中 NID2 的含量。
存储与运输：一般需要在 2-8℃、避光防潮的条件下保存，运输时通常也要保持低温环境。
性能指标：灵敏度一般可达 ng/mL 级水平，如有的试剂盒灵敏度可达 0.174ng/mL，检测范围常处于 0.312-20ng/mL 区间，批内变异系数通常 CV＜10%，批间变异系数 CV＜12%。

双抗夹心法是 ELISA 中最常用的定量检测技术，核心是通过两种特异性抗体 “捕获 + 检测” 目标抗原，实现高灵敏度、高特异性的定量分析。

一、核心原理
包被：将针对目标抗原的捕获抗体（ 抗体）固相化到酶标板微孔内壁，形成固相抗体。
结合抗原：加入待测样本或标准品，样本中的目标抗原与固相捕获抗体特异性结合，形成 “固相抗体 - 抗原” 复合物，洗涤去除未结合的杂蛋白。
结合检测抗体：加入酶标记的检测抗体（ 抗体，与捕获抗体识别抗原的不同表位），检测抗体与抗原另一端结合，形成 “固相抗体 - 抗原 - 酶标检测抗体” 的夹心复合物，再次洗涤去除游离检测抗体。

显色与定量：加入酶底物（如 TMB、OPD），酶（常用 HRP、AP）催化底物显色，显色强度与样本中抗原浓度正相关。加入终止液终止反应后，用酶标仪检测吸光度，通过标准曲线计算样本中抗原的具体浓度。

二、关键特点
特异性高：两种抗体均针对目标抗原，且识别不同表位，交叉反应风险低，能有效排除杂蛋白干扰。
灵敏度强：夹心结构可放大信号，酶催化反应进一步增强检测信号，能检出低至 pg/mL 或 ng/mL 级别的抗原。
适用范围广：仅适用于具有两个及以上抗原表位的大分子抗原（如蛋白质、多肽、病毒颗粒等），无法检测小分子抗原（无足够表位结合两种抗体）。
定量准确：标准曲线线性关系良好，可通过梯度浓度标准品精准推算样本中抗原浓度，重复性佳（板内 / 板间 CV 通常＜10%-15%）。

三、核心操作流程
包被：用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液 pH9.6）稀释捕获抗体，加入酶标板，4℃孵育 12-16 小时或 37℃孵育 2 小时，洗涤 3-5 次。

封闭：加入封闭液（如 5% 脱脂奶粉、BSA），37℃孵育 1-2 小时，封闭未结合抗体的空白位点，洗涤去除多余封闭液。

加样反应：加入梯度浓度标准品和待测样本，37℃孵育 1-2 小时，让抗原与捕获抗体充分结合，洗涤去除未结合抗原。

加检测抗体：加入酶标记的检测抗体，37℃孵育 1 小时，洗涤去除游离检测抗体。

显色：加入底物溶液，37℃避光孵育 10-30 分钟（根据试剂盒要求调整），观察显色情况。

终止与检测：加入终止液（如硫酸溶液），15 分钟内用酶标仪在对应波长（如 TMB 底物检测波长 450nm）读取吸光度。

结果计算：以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，代入样本吸光度值计算抗原浓度。

四、关键注意事项
抗体选择：捕获抗体与检测抗体需配对使用，确保识别抗原的不同表位，避免交叉竞争影响结合。

洗涤步骤：每步反应后需充分洗涤（用 PBST 缓冲液），避免未结合物质残留导致背景偏高或假阳性。

反应条件控制：严格控制孵育温度、时间，底物显色需避光，终止后及时检测，避免显色过度或褪色。

试剂质量：抗体、酶标记物、底物需在有效期内储存使用，避免因试剂失效影响检测结果。

做ELISA实验时，样本量对数据可靠性有什么影响？

核心结论是样本量（包括单样本上样量、总样本数量）直接影响数据的准确性、重复性和统计学意义，需匹配试剂盒要求和实验设计。

一、单样本上样量的影响
上样量不足（低于试剂盒规定下限）：样本中目标物总量不够，吸光度值接近空白对照，低于检测限，导致 “假阴性” 或无法准确定量，数据可靠性极低。
上样量过多（高于规定上限）：目标物浓度超出标准曲线范围，吸光度值饱和（平台期），无法通过曲线推算真实浓度，需稀释后重测，否则数据失真。
上样量不一致：平行孔或不同样本上样量误差＞5%，会直接导致吸光度值波动，平行孔 CV 值升高（＞10%），重复性下降，无法排除操作误差干扰。

二、总样本数量的影响
样本数量过少（如每组＜3 个生物学重复）：无法反映群体真实水平，易受个体差异、偶然误差影响，统计学检验无意义，结论缺乏说服力。
样本数量充足（每组≥6 个生物学重复）：能降低随机误差，更准确体现实验处理效应，统计学结果可靠，可有效验证数据的重复性和普遍性。
重复次数不足：仅 1-2 次技术重复无法排除操作失误，建议每个样本设置 3 个平行孔（技术重复）+ 至少 3 个生物学重复，减少单一误差对结果的影响。

三、特殊样本的样本量考量
低浓度样本：需适当增加上样量（在试剂盒允许范围内），提高目标物检出概率，避免因信号过弱导致数据不可靠。
复杂基质样本（如组织匀浆、细胞裂解液）：上样量需控制在试剂盒推荐范围，过多易引入基质干扰，导致背景偏高或特异性下降，反而降低数据可靠性。
珍贵样本：可按试剂盒最小上样量操作，搭配 3 个以上平行孔，在保证数据重复性的同时，减少样本损耗。

相关产品：

上海笃玛生物科技有限公司