产品货号：DM-Cat6773

产品规格：48/96T

牛前lie腺特异膜抗原（PSMA）ELISA 检测试剂盒是用于检测牛体内 PSMA 含量的科研工具，以下是具体介绍：
检测原理：通常采用双抗体夹心 ELISA 法。先将针对牛 PSMA 的特异性抗体包被在微孔板上，加入待检样本，若样本中有 PSMA，会与包被抗体结合，再加入生物素或酶标记的另一种 PSMA 检测抗体，形成抗体 - 抗原 - 标记抗体复合物， 加入底物，通过酶催化底物显色，颜色深浅与样本中 PSMA 含量呈正比。
样本要求：适用的样本类型通常包括血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等。
试剂盒组成：一般包括 PSMA 包被微孔板（通常为 96 孔或 48 孔）、PSMA 冻干标准品、100X 生物素标记 PSMA 检测抗体、100X 亲和素 - HRP 结合物、样本稀释液、检测抗体稀释液、结合物稀释液、25X 或其他浓度的洗涤缓冲液、TMB 底物、终止液等。
操作要点：试剂盒使用前要恢复至室温，样本需要澄清无杂物。加样需精准，依次完成孵育、洗板、加酶结合物、显色等步骤，最终在酶标仪 450nm 波长处读取吸光度值，并依据标准曲线换算出样品中 PSMA 的含量。
存储与运输：通常需要在 2-8℃避光保存，若长期不用，部分试剂可置于 - 20℃保存，运输时需用冰袋、干冰等维持低温环境。
性能指标：预包被微孔板的批内变异系数一般小于 10%，批间变异系数通常也在 10% - 15% 以内，并且要经过严格的交叉反应和干扰测试，以确保检测结果的可靠性。

双抗夹心法是 ELISA 中最常用的定量检测技术，核心是通过两种特异性抗体 “捕获 + 检测” 目标抗原，实现高灵敏度、高特异性的定量分析。

显色与定量：加入酶底物（如 TMB、OPD），酶（常用 HRP、AP）催化底物显色，显色强度与样本中抗原浓度正相关。加入终止液终止反应后，用酶标仪检测吸光度，通过标准曲线计算样本中抗原的具体浓度。

二、关键特点
特异性高：两种抗体均针对目标抗原，且识别不同表位，交叉反应风险低，能有效排除杂蛋白干扰。
灵敏度强：夹心结构可放大信号，酶催化反应进一步增强检测信号，能检出低至 pg/mL 或 ng/mL 级别的抗原。
适用范围广：仅适用于具有两个及以上抗原表位的大分子抗原（如蛋白质、多肽、病毒颗粒等），无法检测小分子抗原（无足够表位结合两种抗体）。
定量准确：标准曲线线性关系良好，可通过梯度浓度标准品精准推算样本中抗原浓度，重复性佳（板内 / 板间 CV 通常＜10%-15%）。

三、核心操作流程
包被：用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液 pH9.6）稀释捕获抗体，加入酶标板，4℃孵育 12-16 小时或 37℃孵育 2 小时，洗涤 3-5 次。

封闭：加入封闭液（如 5% 脱脂奶粉、BSA），37℃孵育 1-2 小时，封闭未结合抗体的空白位点，洗涤去除多余封闭液。

加样反应：加入梯度浓度标准品和待测样本，37℃孵育 1-2 小时，让抗原与捕获抗体充分结合，洗涤去除未结合抗原。

加检测抗体：加入酶标记的检测抗体，37℃孵育 1 小时，洗涤去除游离检测抗体。

显色：加入底物溶液，37℃避光孵育 10-30 分钟（根据试剂盒要求调整），观察显色情况。

终止与检测：加入终止液（如硫酸溶液），15 分钟内用酶标仪在对应波长（如 TMB 底物检测波长 450nm）读取吸光度。

结果计算：以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，代入样本吸光度值计算抗原浓度。

洗涤步骤：每步反应后需充分洗涤（用 PBST 缓冲液），避免未结合物质残留导致背景偏高或假阳性。

反应条件控制：严格控制孵育温度、时间，底物显色需避光，终止后及时检测，避免显色过度或褪色。

ELISA 实验曲线图（标准曲线）通过 “数据整理→模型拟合→验证可靠性” 三步计算，核心是用标准品浓度与对应吸光度值建立回归方程，用于推算样本浓度。
一、前期数据准备
整理原始数据：记录标准品各浓度梯度（如 0、10、50、200、1000pg/mL）对应的吸光度（A 值），每个浓度至少取 3 个平行孔的平均值，同时扣除空白对照的 A 值（背景校正）。
剔除异常值：若平行孔 A 值变异系数（CV）＞10%，需检查是否为操作误差，必要时剔除异常数据后重新计算平均值，避免影响曲线拟合。

明确横纵坐标：横坐标（X 轴）为标准品浓度（通常取对数，如 log10 浓度，使曲线更线性），纵坐标（Y 轴）为校正后的吸光度值（A 值）。

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