大鼠腺苷A1受体(ADORA1)ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-D9623

产品规格：48/96T

大鼠腺苷 A1 受体（ADORA1）ELISA 检测试剂盒是一种用于定量测定大鼠样本中 ADORA1 含量的科研工具，以下是其详细介绍：
检测原理：通常采用双抗体夹心 ELISA 法。先将针对 ADORA1 的特异性抗体包被在酶标板上，加入样品或标准品后，其中的 ADORA1 抗原会与包被抗体结合，然后依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，形成抗体 - 抗原 - 生物素化抗体 - 酶标亲和素的免疫复合物，加入显色底物 TMB，TMB 在辣根过氧化物酶催化下显色，通过酶标仪检测吸光度，计算出样品中 ADORA1 的浓度。
检测范围：检测范围为 0.156 - 10ng/mL。
灵敏度：一般能达到 0.058 - 0.064ng/mL，即可以检测到样本中低至 0.058 - 0.064ng/mL 的 ADORA1 含量。
样本类型：适用的样本类型包括血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液以及其他生物体液等。
试剂盒组成：一般包含包被好抗体的酶标板、标准品、样品稀释液、生物素化抗体、辣根过氧化物酶标记的亲和素（或酶标抗体）、显色剂 A、显色剂 B、终止液、浓缩洗涤液等。
性能特点：准确性上，标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值常大于等于 0.9900。特异性良好，ADORA1 与结构类似物基本无明显交叉反应或干扰。重复性方面，板内变异系数通常小于 10%，板间变异系数小于 12% - 15%。
保存条件与有效期：一般需要在 2 - 8℃、避光防潮的条件下保存，有效期为 6 个月。

双抗夹心法是 ELISA 中最常用的定量检测技术，核心是通过两种特异性抗体 “捕获 + 检测” 目标抗原，实现高灵敏度、高特异性的定量分析。

显色与定量：加入酶底物（如 TMB、OPD），酶（常用 HRP、AP）催化底物显色，显色强度与样本中抗原浓度正相关。加入终止液终止反应后，用酶标仪检测吸光度，通过标准曲线计算样本中抗原的具体浓度。

二、关键特点
特异性高：两种抗体均针对目标抗原，且识别不同表位，交叉反应风险低，能有效排除杂蛋白干扰。
灵敏度强：夹心结构可放大信号，酶催化反应进一步增强检测信号，能检出低至 pg/mL 或 ng/mL 级别的抗原。
适用范围广：仅适用于具有两个及以上抗原表位的大分子抗原（如蛋白质、多肽、病毒颗粒等），无法检测小分子抗原（无足够表位结合两种抗体）。
定量准确：标准曲线线性关系良好，可通过梯度浓度标准品精准推算样本中抗原浓度，重复性佳（板内 / 板间 CV 通常＜10%-15%）。

三、核心操作流程
包被：用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液 pH9.6）稀释捕获抗体，加入酶标板，4℃孵育 12-16 小时或 37℃孵育 2 小时，洗涤 3-5 次。

封闭：加入封闭液（如 5% 脱脂奶粉、BSA），37℃孵育 1-2 小时，封闭未结合抗体的空白位点，洗涤去除多余封闭液。

加样反应：加入梯度浓度标准品和待测样本，37℃孵育 1-2 小时，让抗原与捕获抗体充分结合，洗涤去除未结合抗原。

加检测抗体：加入酶标记的检测抗体，37℃孵育 1 小时，洗涤去除游离检测抗体。

显色：加入底物溶液，37℃避光孵育 10-30 分钟（根据试剂盒要求调整），观察显色情况。

终止与检测：加入终止液（如硫酸溶液），15 分钟内用酶标仪在对应波长（如 TMB 底物检测波长 450nm）读取吸光度。

结果计算：以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，代入样本吸光度值计算抗原浓度。

四、关键注意事项
抗体选择：捕获抗体与检测抗体需配对使用，确保识别抗原的不同表位，避免交叉竞争影响结合。

洗涤步骤：每步反应后需充分洗涤（用 PBST 缓冲液），避免未结合物质残留导致背景偏高或假阳性。

反应条件控制：严格控制孵育温度、时间，底物显色需避光，终止后及时检测，避免显色过度或褪色。

试剂质量：抗体、酶标记物、底物需在有效期内储存使用，避免因试剂失效影响检测结果。

选择 ELISA 试剂盒需围绕 “检测目标、样本类型、实验需求、产品性能” 四大核心，兼顾准确性、适用性和性价比，避免盲目选型。

锁定检测目标：精准确认目标抗原 / 抗体（如大鼠 PDCD1LG1、人 IL-6），明确物种（人 / 大鼠 / 小鼠等）和检测类型（定量 / 定性），避免物种或指标错配。

匹配样本类型：根据实验室样本（血清 / 血浆 / 组织匀浆 / 细胞上清等）选择，优先选明确标注 “适配该样本类型” 的试剂盒，部分试剂盒需特殊样本预处理，需提前确认操作可行性。

明确检测范围与灵敏度：按样本中目标物浓度估算，试剂盒检测范围需覆盖样本预期浓度（如样本浓度约 10-100ng/mL，选择检测范围 5-200ng/mL 的试剂盒），灵敏度需低于样本 预期浓度，避免无法检出或超出量程。

特异性：优先选标注 “无交叉反应” 或 “交叉反应率＜5%” 的试剂盒，确保不与样本中其他类似物质发生干扰，尤其检测复杂样本（如组织匀浆）时需重点关注。

重复性：查看产品说明中板内 / 板间变异系数（CV）， 试剂盒板内 CV＜10%、板间 CV＜15%，保证实验结果稳定可靠。

线性关系：标准曲线相关系数 R2≥0.99 为合格，线性越好，定量结果越精准，避免因线性不佳导致浓度推算误差。

方法学类型：双抗夹心法（适用于大分子抗原，特异性高、灵敏度强）、间接法（适用于小分子抗原或抗体检测）、竞争法（适用于小分子或半抗原），按检测目标特性选择。

实验周期与操作复杂度：快速检测需求可选 “一步法” 或 “短孵育时间（如 30 分钟 / 孔）” 的试剂盒；新手或高通量检测需选操作流程简单、步骤少的产品，减少人为误差。

合规与溯源需求：临床检验、药物研发等合规场景，需选带 CE、FDA 认证或符合 ISO 15189 标准的试剂盒；科研场景可选择性价比高的科研级产品，但需确保性能参数明确。

ELISA 实验数据可靠性需通过 “对照验证、重复性分析、曲线拟合质量、样本检测合理性” 四大维度综合判断，核心是满足预设质控标准。

一、对照结果是否符合标准
空白对照：吸光度（A 值）需低于试剂盒规定阈值（通常＜0.1 或 0.2A），且无明显显色，证明无试剂污染或杂光干扰。
阴性对照：A 值应接近空白对照，与阳性对照的比值需满足试剂盒要求（通常阴性 / 阳性＜0.3），无假阳性信号。
阳性对照 / 校准品：A 值需落在标准曲线线性范围内，检测浓度与已知浓度的偏差≤15%（中高浓度）、≤20%（低浓度），证明试剂活性正常。
加样回收实验：向已知浓度的样本中加入标准品，回收率需在 85%-115% 之间，说明样本无明显基质效应。

二、重复性是否达标
平行孔重复性：同一标准品或样本的 3 个以上平行孔 A 值变异系数（CV）≤10%，证明操作过程稳定，无偶然误差。
板内 / 板间重复性：板内不同孔位的标准品检测 CV≤10%，不同批次实验（同试剂盒）的标准曲线关键参数（如 EC50、斜率）偏差≤15%，确保数据可复现。
人员 / 设备重复性：不同操作人员或不同酶标仪检测同一样本，结果偏差≤10%，排除人为或设备差异导致的误差。

三、标准曲线拟合质量是否合格
相关系数（R2）：线性回归模型 R2≥0.99，四参数 logistic 回归（4-PL）R2≥0.995，证明浓度与 A 值的相关性良好。
残差分布：残差（实测值与预测值的差值）均匀分布在 0 附近，无明显趋势性偏差，避免模型拟合不当。

曲线覆盖范围：标准品低浓度点 A 值需明显高于空白对照（信噪比≥3），高浓度点无平台期过早出现，确保样本浓度在曲线有效范围内。

上海笃玛生物科技有限公司