自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱

操作注意事项
1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120 pmol/L

试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加
4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度： 检测浓度小于1.0 pmol/L。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月

免责声明
1.  试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.  严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

如何确定酶标仪吸光度的标准值？

酶标仪吸光度没有统一 “标准值”，核心是通过校准 + 对照设定确定合理参考范围。
一、核心前提：仪器校准（保证吸光度准确性）
用标准滤光片校准，覆盖常用波长（如 450nm、570nm），确保吸光度读数误差在允许范围内。
定期做空白校准，以不含样品、酶底物的反应液为空白，扣除背景吸光干扰。
二、标准值设定的核心方法：对照体系法
空白对照：设定 “无酶 + 无底物” 或 “仅反应缓冲液” 的孔为空白，其吸光度作为基线（通常接近 0）。
阴性对照：不含目标检测物的样品（如正常血清、空白样品），其吸光度均值 + 2-3 倍标准差作为阴性临界值。
阳性对照：含已知浓度目标物的标准品，通过梯度浓度标准品绘制标准曲线，确定对应吸光度的浓度关联值。
三、特殊场景：行业 / 试剂盒默认标准
商用试剂盒会提供说明书，明确给出阳性 / 阴性判断的吸光度临界值（如 OD450nm≥0.15 为阳性）。
科研场景中，可参考同领域文献的吸光度范围，结合自身实验体系微调。