NAD激酶（NAD kinase, NADK）试剂盒说明书

微量法100管/48样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。

测定原理：

NADK催化NAD⁺磷酸化，生成NADP⁺；NADP⁺可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；在340 nm下测定NADPH增加速率。可反映出NADK活性的大小。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

生化试剂盒微量法是针对微量样本设计的检测方法，核心优势为样本用量少、适配 96 孔板批量检测，广泛应用于科研领域珍贵样本（如微量组织匀浆、细胞上清、穿刺血清等）的定量分析，以下从核心特点、适用场景、操作关键要点及优势总结展开说明：

核心特点样本与试剂用量少：单孔样本用量通常为 20-50μL，试剂用量同步缩减（如 R1 为 100μL、R2 为 20-50μL），远低于常规法（样本多为 100μL 以上），大幅节省珍贵样本。
灵敏度更高：检测下限显著降低，例如微量 BCA 蛋白定量试剂盒检测范围可达 0.5-20μg/mL，常规法则多为 20-2000μg/mL，能精准检测低浓度目标物。

适配高通量检测：专为酶标仪设计，采用 96 孔板操作，可同时检测多个样本，实验效率高，且便于自动化加样设备联用。

试剂体系优化：通过调整试剂浓度、缓冲液配方，弥补微量样本反应信号弱的问题，减少基质干扰，保证检测结果稳定性。

适用场景样本量受限的实验：如动物微量组织样本、原代细胞培养上清、临床穿刺微量血清 / 血浆等。

操作关键要点仪器校准：使用高精度微量加样枪（10-200μL），实验前校准，确保加样体积误差≤2μL；酶标仪需提前预热，校准波长精度。

试剂处理：试剂使用前室温平衡 15-20 分钟，避免温度偏差影响反应速率；严禁反复冻融，开封后尽快用完。

加样规范：加样顺序严格遵循说明书（通常先加样本 / 标准品 + R1，孵育后加 R2），吸头垂直悬空加样，避免接触孔壁造成挂壁；设置空白孔、标准孔梯度及复孔（至少 2 个复孔），减少实验误差。

温育控制：37℃恒温温育，时间精准控制（通常 10-15 分钟），反应板加盖防蒸发膜，防止液体挥发导致浓度变化。

结果判定：标准曲线相关系数 R2 需≥0.99，质控品检测结果需在 ±2SD 范围内；高浓度样本需用配套稀释液稀释，记录倍数并换算最终浓度。

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