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- 品牌：DUMABIO
- 产地：上海
- 型号：100管/96样
- 货号：DM-PS1007
- 纯度：电询
- 价格： ￥6500/盒
- 发布日期： 2025-12-08
- 更新日期： 2026-02-28
| 产地 | 上海 |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-PS1007 |
| 用途 | 科研实验 |
| 包装规格 | 100管/96样 |
| 纯度 | 电询% |
| CAS编号 | |
| 是否进口 | 否 |
3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血tang浓度的维持的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白dai谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。
需自备的仪器和用品
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体14uL×1支，4℃保存；
核心检测原理（主流类型）
均围绕信号与目标物浓度的量效关系展开，最常用分光光度法（朗伯 - 比尔定律：一定波长下，吸光度与目标物浓度成正比），核心原理分 4 类：
直接比色法：目标物与显色剂直接反应生成有色产物，通过吸光度计算浓度（如总蛋白、还原糖检测）；
酶促偶联比色法：目标物经 1~2 步特异性酶促反应，生成有色 / 紫外吸收产物，放大检测信号（如酶活、ATP、乳酸检测，最常用的科研级生化试剂盒原理）；
紫外分光光度法：目标物本身具有特征紫外吸收峰（如核酸 260nm、蛋白 280nm），无需显色直接检测吸光度；
比浊法：目标物与试剂形成悬浮颗粒，悬液浊度与目标物浓度成正比，检测吸光度（如胆固醇、免疫球蛋白检测）。
通用标准化操作流程
所有生化试剂盒检测均遵循样本前处理→试剂准备→加样反应→仪器检测→数据处理的核心流程，严格遵循试剂盒说明书是结果准确的前提（不同指标的温育时间、温度、加样比例差异显著）：
样本前处理：新鲜样本优先，按样本类型处理（组织 / 细胞需匀浆→冰浴裂解→离心取上清；血清 / 尿液需离心去除沉淀；样本需按要求稀释，避免浓度超出检测线性范围），全程冰浴操作，防止目标物降解；
试剂准备：将试剂盒内试剂平衡至室温（冷冻试剂避免反复冻融，建议分装），按比例配制工作液（现配现用，避免试剂失效），轻轻混匀（勿剧烈震荡，防止酶试剂失活）；
加样反应：在 96 孔板 / 比色皿中依次加入空白对照、标准品（梯度）、样本，再加入工作液，快速混匀后，按说明书在恒温条件下温育（水浴 / 恒温箱，温度误差≤±0.5℃，温育时间精准把控）；
仪器检测：提前校准分光光度计 / 酶标仪（设置说明书指定波长，空白对照调零），反应结束后立即检测吸光度（部分有色产物易褪色，避免放置）；
数据处理：以标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线（要求 R2≥0.99，线性良好），根据样本吸光度计算浓度，需还原样本前处理的稀释倍数，平行样结果取平均值。
生化试剂盒里的微量法和分光光度法，核心是两种不同的检测体系设计，二者在样本用量、仪器适配、操作流程和适用场景上有明显区别。下面从定义、核心差异、优缺点、适用场景等方面完整拆解。
一、基本定义
1. 分光光度法（常规比色法）
这是生化检测 、最通用的方法，基于朗伯 - 比尔定律：在稀溶液中，待测物质在特定波长下的吸光度，与物质浓度呈正比。试剂盒配套的反应体系体积通常较大，一般为毫升级别（mL），使用紫外可见分光光度计（普通分光光度计）检测，比色皿光程多为 1cm，是实验室常规生化指标检测的标准方案。
2. 微量法
属于分光光度法的微型化、微量化改良版本，本质依然遵循朗伯 - 比尔定律，只是为了适配微量样本和专用仪器，对反应体系、检测方式做了优化。反应体系体积大幅缩小，一般为微升级别（μL），通常几十到几百微升，必须使用酶标仪（微孔板分光光度计） 搭配 96 孔 / 384 孔板检测，光程远小于 1cm，通过试剂盒配套的公式校正吸光度与浓度的关系。
常规分光光度法
优点
1. 技术成熟，结果稳定性和重复性好，是行业通用的参考方法，数据认可度高。
2. 操作容错率高，移液、温育等操作的微小误差，对最终结果影响有限。
3. 仪器普及率高，普通实验室都配备基础分光光度计，无需额外采购专用设备。
缺点
1. 样本和试剂消耗量大，对于 样本（如临床微量体液、昆虫样本、细胞裂解液）无法适用。
2. 通量低，批量检测时效率低下，耗时耗力。
微量法
优点
1. 样本需求量极低， 适配珍贵、微量、难以获取的样本。
2. 试剂消耗大幅减少，长期批量检测可降低实验成本。
3. 高通量检测，搭配酶标仪可同时完成大量样本检测，提升实验效率。
缺点
1. 对操作要求严苛，加样精度、温育条件、酶标仪校准都会直接影响结果。
2. 必须依赖酶标仪，没有酶标仪无法完成检测，仪器成本更高。
3. 因体系微型化，部分指标的检测下限、线性范围会与常规法存在差异，需要严格按照试剂盒说明书校正。
生化试剂盒的保存条件
生化试剂盒的保存需严格遵循说明书要求，核心原则是按组分类型分类保存、避免反复冻融、控制温度波动，具体条件如下：
通用保存温度分类
2~8℃冷藏保存：适用于多数常规试剂组分，如缓冲液、底物液（非酶类）、稀释液、显色剂等。这类试剂对温度相对不敏感，冷藏可维持其化学稳定性，避免室温下成分降解。
-20℃冷冻保存：适用于酶类试剂（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶）、标准品、质控品、抗体 / 抗原等生物活性成分。冷冻可抑制酶活性衰减和蛋白降解，需注意分装为小体积，防止反复冻融导致活性丧失。
-80℃超低温保存：针对特殊敏感组分（如 RNA 酶抑制剂、高活性蛋白、稀有标准品），长期保存需超低温环境，降低分子运动速率，延长保质期。
室温保存（15~25℃）： 部分稳定性极高的组分，如干燥剂、终止液（强酸 / 强碱类）、固体试剂等，需密封置于阴凉干燥处，避免潮湿和阳光直射。
实验前准备注意事项
试剂管理严格按说明书温度解冻 / 平衡试剂：冷冻试剂（酶标物、标准品）需提前分装，避免反复冻融；冷藏试剂室温平衡 15-30 min，减少温度差对反应体系的影响。
检查试剂状态：若出现浑浊、沉淀、变色、异味，或超出有效期 / 开封后使用期限，立即废弃。
试剂混匀方式：解冻后轻柔颠倒混匀，禁止剧烈振荡，防止酶活性失活或产生气泡干扰检测。
样本预处理样本需澄清无杂质，浑浊样本 4℃ 3000-5000 rpm 离心 10-15 min 取上清，或 0.22 μm 滤膜过滤；脂质污染样本加 1% Triton X-100 处理后离心。
严格按说明书稀释样本，避免浓度超出检测线性范围；稀释用缓冲液需与试剂盒配套，禁止用水替代。
仪器与耗材准备校准酶标仪 / 分光光度计波长，用空白孔调零，确保仪器处于正常工作状态。
选用一次性无菌比色杯 / 酶标板，重复使用的玻璃器皿需 清洗并灭菌，避免残留洗涤剂或污染物干扰反应。
避免反复冻融：冷冻试剂 解冻后，建议按需分装成若干小份，后续使用时仅解冻所需量，反复冻融会破坏蛋白和酶的空间结构，导致活性下降。
避光保存：显色剂、荧光底物、酶标记物等对光照敏感，需用棕色瓶或锡箔纸包裹容器，防止光照引发氧化反应，影响试剂性能。
密封防污染：所有试剂瓶需拧紧瓶盖，防止挥发、渗漏或微生物污染；开封后建议标注开封日期，优先使用。
温度稳定性控制：转运或取放试剂时，需使用冰袋或低温保温箱，缩短室温暴露时间（＜30 min）；避免将试剂置于冰箱冷冻室与冷藏室交界处，防止温度反复波动。
特殊组分单独保存：部分试剂盒含易挥发（如有机溶剂）、易潮解组分，需单独密封存放，必要时放置干燥剂。
检测原理与操作的关键差异
光程与浓度换算
1.常规分光光度法使用 1cm 标准比色皿，计算公式直接使用标准朗伯 - 比尔定律，试剂盒提供的标准曲线、计算公式通用度高。
2.微量法使用微孔板检测，实际光程远小于 1cm，且受孔内液体体积影响，试剂盒会提供专属的校正系数，需要按照说明书的公式，将酶标仪测得的吸光度换算为实际浓度，不能直接套用常规分光光度法的计算方式。
操作流程
1.常规法：样本 + 工作液混匀→移入比色皿→分光光度计检测→记录吸光度→计算。
2.微量法：样本 + 工作液按微量比例加入微孔板→封口膜密封、振荡混匀→温育→酶标仪设定波长检测→利用试剂盒校正公式计算。
适用场景选择
优先选择常规分光光度法的情况
1. 样本来源充足，无样本量限制；
2. 实验室只有普通分光光度计，无酶标仪；
3. 追求高稳定性、高准确度，需要出具认可度高的检测数据；
4. 检测样本数量少，对检测通量无要求。
优先选择微量法的情况
1. 样本稀缺珍贵，如小鼠微量血清、细胞上清、植物微量组织、临床穿刺液等；
2. 需要批量、高通量检测，短时间内完成大量样本测试；
3. 实验室配备酶标仪，希望降低试剂耗材成本；
4. 高通量筛选、大规模样本初筛实验。
使用注意事项
1. 两种方法不可直接混用仪器，微量法试剂盒不能用普通分光光度计检测，常规法试剂盒也不适合直接用酶标仪微量检测，否则会导致结果偏差。
2. 微量法必须保证移液器精准校准，选择适配微量体积的移液器，避免加样误差。
3. 无论哪种方法，都要严格控制温育温度、时间，保证空白对照、标准品设置规范，才能保证结果可靠。
生化试剂盒操作步骤
实验后处理注意事项
结果计算与验证绘制标准曲线时，确保 R2≥0.99；样本浓度需乘以稀释倍数，若超出标准曲线范围需重新稀释检测。
对比质控品检测值与说明书给定范围，若超出范围需排查原因（试剂、操作、仪器）并重新实验。
试剂与耗材处理未用完的试剂按组分特性分类保存（冷藏 / 冷冻 / 室温），密封瓶口并标注开封日期；冷冻试剂分装后避免再次冻融。
实验废液按生物安全要求处理，一次性耗材（吸头、酶标板）需高压灭菌后丢弃，防止污染环境。
数据记录与追溯完整记录实验信息：试剂批号、有效期、孵育条件、仪器参数、样本信息等，便于结果追溯和问题排查。
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