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肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒
  • 品牌:DUMABIO
  • 产地:上海
  • 型号:100管/96样
  • 货号:DM-CO21017
  • 纯度:电询
  • 价格: ¥1500/盒
  • 发布日期: 2025-12-11
  • 更新日期: 2026-02-28
产品详请
产地 上海
品牌 DUMABIO
货号 DM-CO21017
用途 科研实验
包装规格 100管/96样
纯度 电询%
CAS编号
是否进口

肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)测定试剂盒

微量法100T/96S

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于肌肉以及脑等组织中,能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和ATP再生中有重要作用,是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。

测定原理:

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm光吸收值增加。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂1瓶,4℃避光保存,使用前加10mL蒸馏水溶解。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。

工作液:临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。使用前37℃温育2min。


酶的核心特点
高纯度:多为重组表达、亲和层析纯化,杂蛋白 / 核酸 / 蛋白酶残留极低。
高特异性:对底物 / 序列高度专一,减少非特异性反应。
高活性与稳定性:单位活性明确,冻融 / 储存稳定性好。
低干扰:低内毒素、无 RNase/DNase、无蛋白酶,适合敏感实验。
批次一致性:适合长期课题、多批次对比、标准化实验。


酶的核心特点
高纯度:多为重组表达、亲和层析纯化,杂蛋白 / 核酸 / 蛋白酶残留极低。
高特异性:对底物 / 序列高度专一,减少非特异性反应。
高活性与稳定性:单位活性明确,冻融 / 储存稳定性好。
低干扰:低内毒素、无 RNase/DNase、无蛋白酶,适合敏感实验。
批次一致性:适合长期课题、多批次对比、标准化实验。


生化试剂盒

用途:定量检测样本中酶活性、代谢物、离子等。

原理:酶促 / 化学反应 → 显色 → 比色定量。

组成:标准品、试剂 1、试剂 2、终止液(部分)、说明书。

样本:血清 / 血浆、尿液、组织匀浆、细胞上清;避免溶血、脂血、反复冻融。

操作:试剂室温平衡 → 样本 / 标准品 + 试剂孵育 → 加终止液 → 酶标仪测 OD → 代入曲线算浓度 / 活性。

计算:浓度 = 标准曲线对应值 × 稀释倍数。



异常数据排查与处理

异常现象

常见原因

处理方法

标准曲线线性差

(R2<0.99)


标准品配制误差、温育温度不均、底物显色不足

重新配制标准品,严格控制反应条件,延长显色时间(需验证线性)

样本浓度远高于标准曲线上限

样本未稀释或稀释倍数不足

对样本进行梯度稀释,重新检测

空白孔吸光度过高

试剂污染、仪器基线漂移、样本浑浊

更换试剂,校准仪器,对样本进行离心预处理

重复孔数据差异大

加样误差、反应体系混匀不均

优化加样操作,确保试剂与样本充分混匀,增加重复孔数量

生化试剂盒的通用测定步骤可分为 前期准备、试剂配制、参数设置、校准与质控、样本检测、结果计算 六大核心环节,具体细节如下:

一、前期准备

1. 试剂准备:检查试剂盒各组分(R1、R2、校准品、质控品等)是否齐全、无异常(如浑浊、沉淀、变色),按要求从储存环境取出,平衡至室温(通常 20~25℃,平衡时间 5~30 分钟,具体以试剂盒说明为准),轻轻摇匀备用。

2. 样本准备:确认待检测样本类型符合要求,已按规范完成采集与处理(如血清 / 血浆样本离心分离、组织匀浆制备、尿液离心去沉淀等);若样本需稀释或预处理(如去除干扰物),提前完成相关操作。

3. 仪器准备:确认使用的生化分析仪 / 酶标仪等仪器符合试剂盒适用要求,提前开机预热,进行仪器清洁(避免残留污染),准备好所需耗材(如反应杯、移液枪头)。


二、试剂配制(如适用)

1. 即用型试剂:无需额外配制,平衡至室温后直接使用。

2. 需混合试剂:按试剂盒规定比例(如 R1:R2=4:1、3:1 等)准确混合试剂组分,现配现用,避免提前配制导致试剂失效。

3. 校准品配制:用指定稀释液(如试剂盒配套稀释液、生理盐水)将校准品稀释至所需浓度梯度(通常 3~5 个梯度,如 0、20、40、80、160 nmol/L),稀释后充分摇匀备用。


三、仪器参数设置

根据试剂盒要求及所用仪器型号,设置核心检测参数:

1. 基础参数:检测方法(终点法、速率法、两点法等)、孵育温度(通常 37℃)、反应时间(含孵育时间和检测时间)。

2. 波长参数:主检测波长(如 450 nm、540 nm,根据反应产物特征吸收峰确定),若存在背景干扰,需设置副波长进行校正。

3. 液量参数:明确试剂与样本的比例(如 R1 200 μL + 样本 20 μL,孵育后加 R2 50 μL),确保移液体积准确。



四、校准与质量控制(保障结果准确性)

1. 校准程序:将配制好的各浓度梯度校准品依次加入反应杯,按设置的参数进行检测,记录各校准品的吸光度值 / 吸光度变化率;以校准品浓度为横坐标(X 轴)、对应吸光度相关值为纵坐标(Y 轴),采用指定拟合方式(如线性回归、Spline 拟合)绘制标准曲线,要求相关系数 R2≥0.990(具体以试剂盒性能指标为准)。

2. 质控程序:同步测定高、中、低三个水平的质控品,检测完成后查看质控结果是否在规定靶值范围内;若超出范围,需排查试剂、仪器、操作等环节问题,解决后重新进行校准与质控。


五、样本检测

1. 按仪器参数设定的试剂 / 样本比例,依次向反应杯加入对应试剂和待检测样本,确保加样顺序正确(如先加 R1 和样本,孵育后再加 R2)。

2. 按规定的孵育温度和时间完成反应,避免反应不充分或过度反应。

3. 反应结束后,仪器自动读取各样本的吸光度值 / 吸光度变化率,记录原始数据。


六、结果计算与记录

1. 依据绘制好的标准曲线,结合样本的吸光度相关值,自动或手动计算样本中被测物的浓度 / 活性(如公式:被测物浓度 =(样本吸光度值 - 空白吸光度值)× 校准品浓度 /(校准品吸光度值 - 空白吸光度值))。

2. 记录检测结果,同时标注校准曲线相关系数、质控结果等关键信息,便于后续结果追溯与验证。

生化试剂盒和ELISA试剂盒的区别

对比维度

生化试剂盒

ELISA试剂盒




核心原理

基于酶促反应或理化反应,通过检测反应体系的吸光度、酸碱度、浊度等理化性质变化,定量目标物含量(如酶催化底物显色、物质与试剂的特异性结合)

基于抗原抗体特异性免疫结合+ 酶促显色反应,通过抗体对目标抗原的精准识别捕获,再经酶标底物显色实现定量 / 定性


检测对象

以小分子、离子、酶活性为主,如葡萄糖、胆固醇、转氨酶、乳酸脱氢酶、无机离子等

以大分子生物活性物质为主,如蛋白、抗原、抗体、激素、细胞因子、病毒抗原等



特异性

依赖底物或试剂的化学特异性,特异性相对较低,易受样本中同类物质干扰(如检测某类酶时,其他酶可能交叉反应)

依赖抗体的免疫特异性,特异性极高,可区分结构相似的抗原(如不同亚型的蛋白),干扰小



灵敏度

中等,适用于中高浓度目标物检测(通常 μmol/L 级别)

极高,适用于微量 / 痕量目标物检测(通常 ng/mL~pg/mL 级别),可检测样本中极低含量的目标分子



操作流程

步骤简单,多为一步或两步反应,无需洗板;样本加试剂后孵育时间短(通常 10~30 min)

流程复杂,包含包被、封闭、加样、孵育、洗板、显色等步骤;洗板为关键环节(需去除未结合物质),全程耗时较长(通常 1~3 h)

所需仪器

主要用分光光度计、全自动生化分析仪

主要用酶标仪(部分需洗板机辅助完成洗板步骤)


适用场景

临床常规生化指标检测(如gan功能、肾功能、血tang血zhi)、食品理化成分分析

临床疾病诊断(如抗体检测、zhong瘤标志物筛查)、科研中蛋白定量、药物浓度检测、病原体检测等


样本基质影响

受样本浑浊度、脂血、溶血影响较大,需对样本进行预处理(如离心去杂质)

受基质效应影响较小,但样本中的杂蛋白可能导致非特异性吸附,需通过封闭步骤消除


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