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| 产地 | 上海 |
| 品牌 | DUMABIO |
| 货号 | DM-P4501003 |
| 用途 | 科研实验 |
| 包装规格 | 100管/48样 |
| 纯度 | 电询% |
| CAS编号 | |
| 是否进口 |
氨基比林-N-脱甲基酶(AND)活性测定试剂盒
微量法 100管/48样
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
细胞色素P450酶是一组在外源物质代谢中,尤其是药物和毒物,具有重要作用的酶系。AND作为P450酶系的重要一员,相当于CYP3A4亚型,与药物的去甲基化反应密切相关。
测定原理:
AND催化氨基比林释放甲醛,通过Nash比色法测定甲醛含量,即可计算出AND活性。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、无水乙醇和冰。
试剂盒的组成
基础试剂:通常为试剂 1(R1)、试剂 2(R2),部分试剂盒可能含试剂 3(R3)等,主要成分包括缓冲液、酶、底物、辅助因子等,需标注各组分的装量(mL / 瓶)或可测试数量。
配套校准 / 质控组分(如适用):校准品:含被测物标准品,搭配特定基质(如人血清、BSA 等),提供明确靶值,且定值需溯源至国际 / 国家标准品;
质控品:含不同浓度(高 / 中 / 低)被测物,用于验证检测结果准确性,靶值范围为批特异;
配套耗材(如适用):如塑料滴管、封板膜等,标注具体数量。
注:不同批号试剂盒的各组分不得混用;校准品、质控品的赋值仅适用于本批号试剂盒。
测定步骤
| 步骤序号 | 操作步骤 | 操作要点 | 注意事项 |
| 1 | 实验准备 | 1. 试剂盒组分(R1、R2、标准品、质控品)室温平衡 15-20 分钟; 2. 处理待测样本(血清 / 血浆 / 匀浆等),按需稀释; 3. 校准微量加样枪,设置酶标仪检测波长 | 1. 试剂避免反复冻融; 2. 样本无溶血、脂血; 3. 吸头一次性使用 |
| 2 | 微量加样 | 反应板各孔加样(单孔用量): - 空白孔:稀释液 20μL + R1 100μL; - 标准 / 质控孔:标品 / 质控品 20μL + R1 100μL; - 样本孔:样本 20μL + R1 100μL;轻1. 严格控制温育温度与时间; 2. 反应板加盖防液体蒸发轻混匀,室温孵育 5 分钟 | 1. 加样顺序不可颠倒; 2. 吸头勿接触孔壁,防止挂壁; 3. 避免试剂交叉污染 |
| 3 | 温育反应 | 各孔加 R2 20μL,混匀后 37℃温育 10-15 分钟(按说明书调整) | 1. 严格控制温育温度与时间; 2. 反应板加盖防液体蒸发 |
| 4 | 终止反应 | 加终止液 20μL,轻柔混匀 | 1. 终止液为强酸 / 强碱,需戴手套操作; 2. 快速加样,保证各孔反应同步终止 |
| 5 | 吸光度测定 | 酶标仪以空白孔调零,测定各孔 OD 值 | 1. 测定前确认孔底无气泡、污渍; 2. 终止反应后 10 分钟内完成检测 |
| 6 | 结果计算 | 1. 计算 ΔOD=OD 样本 / 标品 - OD 空白; 2. 以标品浓度为横坐标、ΔOD 为纵坐标绘制标准曲线; 3. 样本浓度 = 曲线查得浓度 × 稀释倍数 | 1. 标准曲线 R2≥0.99; 2. 质控结果需在合格范围内 |
| 7 | 实验收尾 | 1. 按生物安全规范处理反应废液2. 剩余试剂密封后冷藏保存; 3. 清洗反应板 / 器材 | 1. 试剂开封后尽快用完; 2. 废弃物分类处置,避免污染 |
生化试剂盒的核心分类
按检测原理和目标物类型,可分为以下几大类,覆盖多数实验场景:
1. 代谢物检测试剂盒用于检测血tang、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、尿酸、乳酸、丙酮酸等小分子代谢物,原理多为终点比色法 / 速率比色法。例如血tang试剂盒通过葡萄糖氧化酶(GOD)- 过氧化物酶(POD)偶联反应,生成有色物质,吸光度与葡萄糖浓度正相关。
2. 酶活性检测试剂盒适用于 SOD、CAT、POD、LDH、ALT、AST 等酶活性测定,以速率法为主。通过监测酶促反应过程中底物或产物的吸光度变化速率,计算酶活性单位(U)。比如 SOD 试剂盒利用氮蓝四唑(NBT)光还原法,SOD 抑制 NBT 还原的程度与酶活性相关。
3. 蛋白定量试剂盒包括 BCA、Bradford、Lowry 法试剂盒,其中微量 BCA 试剂盒适合样本量少的场景。BCA 法基于碱性条件下蛋白与 Cu2?结合,还原 BCA 试剂生成紫色复合物,在 562nm 处有特征吸收峰。
4. 离子检测试剂盒用于检测钙、磷、钾、钠等无机离子,如钙试剂盒通过钙与偶氮砷 Ⅲ 结合生成有色络合物,进行比色定量。
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