果糖-1,6-二磷酸（Fructose-1,6 Diphosphate，FDP）试剂盒

分光光度法50管/48样

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果糖1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。

测定原理

醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸降解，产物与DNPH缩合成紫红色物质，在540nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿。

试剂组成和配制

试剂一：液体65mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体1mL×1支，4℃避光保存。

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体40mL×1瓶，4℃保存。

生化试剂盒的通用测定步骤可分为 前期准备、试剂配制、参数设置、校准与质控、样本检测、结果计算 六大核心环节，具体细节如下：

一、前期准备

1. 试剂准备：检查试剂盒各组分（R1、R2、校准品、质控品等）是否齐全、无异常（如浑浊、沉淀、变色），按要求从储存环境取出，平衡至室温（通常 20~25℃，平衡时间 5~30 分钟，具体以试剂盒说明为准），轻轻摇匀备用。

2. 样本准备：确认待检测样本类型符合要求，已按规范完成采集与处理（如血清 / 血浆样本离心分离、组织匀浆制备、尿液离心去沉淀等）；若样本需稀释或预处理（如去除干扰物），提前完成相关操作。

3. 仪器准备：确认使用的生化分析仪 / 酶标仪等仪器符合试剂盒适用要求，提前开机预热，进行仪器清洁（避免残留污染），准备好所需耗材（如反应杯、移液枪头）。

二、试剂配制（如适用）

1. 即用型试剂：无需额外配制，平衡至室温后直接使用。

2. 需混合试剂：按试剂盒规定比例（如 R1:R2=4:1、3:1 等）准确混合试剂组分，现配现用，避免提前配制导致试剂失效。

3. 校准品配制：用指定稀释液（如试剂盒配套稀释液、生理盐水）将校准品稀释至所需浓度梯度（通常 3~5 个梯度，如 0、20、40、80、160 nmol/L），稀释后充分摇匀备用。

三、仪器参数设置

根据试剂盒要求及所用仪器型号，设置核心检测参数：

1. 基础参数：检测方法（终点法、速率法、两点法等）、孵育温度（通常 37℃）、反应时间（含孵育时间和检测时间）。

2. 波长参数：主检测波长（如 450 nm、540 nm，根据反应产物特征吸收峰确定），若存在背景干扰，需设置副波长进行校正。

3. 液量参数：明确试剂与样本的比例（如 R1 200 μL + 样本 20 μL，孵育后加 R2 50 μL），确保移液体积准确。

四、校准与质量控制（保障结果准确性）

1. 校准程序：将配制好的各浓度梯度校准品依次加入反应杯，按设置的参数进行检测，记录各校准品的吸光度值 / 吸光度变化率；以校准品浓度为横坐标（X 轴）、对应吸光度相关值为纵坐标（Y 轴），采用指定拟合方式（如线性回归、Spline 拟合）绘制标准曲线，要求相关系数 R2≥0.990（具体以试剂盒性能指标为准）。

2. 质控程序：同步测定高、中、低三个水平的质控品，检测完成后查看质控结果是否在规定靶值范围内；若超出范围，需排查试剂、仪器、操作等环节问题，解决后重新进行校准与质控。

五、样本检测

1. 按仪器参数设定的试剂 / 样本比例，依次向反应杯加入对应试剂和待检测样本，确保加样顺序正确（如先加 R1 和样本，孵育后再加 R2）。

2. 按规定的孵育温度和时间完成反应，避免反应不充分或过度反应。

3. 反应结束后，仪器自动读取各样本的吸光度值 / 吸光度变化率，记录原始数据。

六、结果计算与记录

1. 依据绘制好的标准曲线，结合样本的吸光度相关值，自动或手动计算样本中被测物的浓度 / 活性（如公式：被测物浓度 =（样本吸光度值 - 空白吸光度值）× 校准品浓度 /（校准品吸光度值 - 空白吸光度值））。

2. 记录检测结果，同时标注校准曲线相关系数、质控结果等关键信息，便于后续结果追溯与验证。

注意事项：

生化试剂盒的储存条件
生化试剂盒的储存条件直接影响试剂活性、稳定性及检测结果可靠性，不同组分的试剂因化学性质差异，储存要求有所区别，核心需把控温度、光照、湿度、避免污染四大关键因素，具体分类说明如下：
按温度分类的核心储存条件

2-8℃冷藏储存
这是最常见的储存条件，适用于多数液态试剂、酶工作液、显色剂、缓冲液等。
示例：葡萄糖检测试剂盒的酶混合液、总蛋白试剂盒的双缩脲试剂、多数血清 / 血浆检测用试剂盒的核心组分。
注意：冷藏时需避免靠近冰箱制冷口（防止局部温度过低结冰），试剂需密封保存，防止冰箱内水汽进入导致试剂稀释或污染。

-20℃冷冻储存
适用于对温度敏感的试剂，如高活性酶制剂、抗体、标准品母液、荧光探针等，冷冻可降低试剂降解速率，延长有效期。
注意：需使用密封性好的冻存管 / 瓶，防止反复冻融（反复冻融会破坏酶结构、降低抗体活性），建议将试剂分装为单次使用量，每次取用后剩余部分立即放回冷冻环境；部分试剂需避免结冰（如某些胶体试剂），需在说明书标注 “避免冷冻”。
-80℃超低温储存
仅适用于特殊高灵敏度试剂盒的核心组分，如稀有酶、生物活性肽、荧光标记物等，多用于长期储存（数月至数年），常见于科研级高端试剂盒。
注意：需配套超低温冰箱，试剂需做好防挥发、防污染包装，取用后快速放回，减少常温暴露时间。

室温储存（15-25℃）
适用于稳定性强的试剂，如部分干粉状试剂、显色剂底物干粉、稀释液、洗涤液等。
注意：需置于阴凉干燥处，避免室温超过 30℃，且远离热源（如烘箱、水浴锅）。

光照控制要求
多数生化试剂（尤其是酶、荧光物质、还原性试剂、发色底物）对光线敏感，光照会导致试剂氧化、分解或变性，需避光储存。
具体措施：选择棕色试剂瓶包装的试剂盒；若为透明瓶，需放入避光袋或棕色避光盒中；避免阳光直射或强光照射的储存位置（如远离实验室窗户、紫外灯）。
典型示例：SOD 试剂盒的底物液、MDA 试剂盒的硫代巴比妥酸（TBA）试剂、荧光法试剂盒的探针溶液，均需严格避光。

湿度与污染防控
防潮要求：干粉状试剂盒（如试剂片剂、冻干酶粉）极易吸潮，吸潮后会结块、活性下降，需储存在湿度≤60% 的干燥环境，可在储存处放置干燥剂（如硅胶干燥剂），且干燥剂需定期更换。
防污染要求：试剂盒开封前需检查包装完整性，开封后需及时密封，避免试剂与空气长时间接触（防止氧化、微生物污染）；不同试剂盒的试剂不可混合储存，防止交叉污染；储存环境需保持清洁，避免灰尘、挥发性化学物质（如酒精、酸雾）污染试剂。

特殊试剂的储存注意事项
标准品与质控品：通常需与试剂盒核心试剂同条件储存，且标准品母液建议分装后冷冻，避免反复冻融导致浓度偏差；部分标准品需避光、防潮，使用前需按说明书平衡至室温再稀释。
易挥发试剂：如某些有机溶剂类试剂，需密封严实，防止挥发导致浓度改变，储存时需远离火源。
配套耗材（如 96 孔板）：若试剂盒含包被好的 96 孔板，需密封在铝箔袋中，置于 2-8℃冷藏，避免孔板干燥导致涂层脱落，影响检测特异性。

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