果糖1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，FDA）试剂盒

分光光度法50管/48样

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植物叶绿体中果糖1,6-二磷酸醛缩酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反应，在各种逆境胁迫下表现不同的响应。

测定原理

果糖1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化NADH和磷酸二羟丙酮生成NAD和α-磷酸甘油，340nm处吸光值的变化可反映果糖1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、震荡仪、研钵、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。

试剂组成和配制   

提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

提取液二：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂五：液体×1瓶，4℃避光保存；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

生化试剂盒的通用测定步骤可分为 前期准备、试剂配制、参数设置、校准与质控、样本检测、结果计算 六大核心环节，具体细节如下：

一、前期准备

1. 试剂准备：检查试剂盒各组分（R1、R2、校准品、质控品等）是否齐全、无异常（如浑浊、沉淀、变色），按要求从储存环境取出，平衡至室温（通常 20~25℃，平衡时间 5~30 分钟，具体以试剂盒说明为准），轻轻摇匀备用。

2. 样本准备：确认待检测样本类型符合要求，已按规范完成采集与处理（如血清 / 血浆样本离心分离、组织匀浆制备、尿液离心去沉淀等）；若样本需稀释或预处理（如去除干扰物），提前完成相关操作。

3. 仪器准备：确认使用的生化分析仪 / 酶标仪等仪器符合试剂盒适用要求，提前开机预热，进行仪器清洁（避免残留污染），准备好所需耗材（如反应杯、移液枪头）。

二、试剂配制（如适用）

1. 即用型试剂：无需额外配制，平衡至室温后直接使用。

2. 需混合试剂：按试剂盒规定比例（如 R1:R2=4:1、3:1 等）准确混合试剂组分，现配现用，避免提前配制导致试剂失效。

3. 校准品配制：用指定稀释液（如试剂盒配套稀释液、生理盐水）将校准品稀释至所需浓度梯度（通常 3~5 个梯度，如 0、20、40、80、160 nmol/L），稀释后充分摇匀备用。

三、仪器参数设置

根据试剂盒要求及所用仪器型号，设置核心检测参数：

1. 基础参数：检测方法（终点法、速率法、两点法等）、孵育温度（通常 37℃）、反应时间（含孵育时间和检测时间）。

2. 波长参数：主检测波长（如 450 nm、540 nm，根据反应产物特征吸收峰确定），若存在背景干扰，需设置副波长进行校正。

3. 液量参数：明确试剂与样本的比例（如 R1 200 μL + 样本 20 μL，孵育后加 R2 50 μL），确保移液体积准确。

四、校准与质量控制（保障结果准确性）

1. 校准程序：将配制好的各浓度梯度校准品依次加入反应杯，按设置的参数进行检测，记录各校准品的吸光度值 / 吸光度变化率；以校准品浓度为横坐标（X 轴）、对应吸光度相关值为纵坐标（Y 轴），采用指定拟合方式（如线性回归、Spline 拟合）绘制标准曲线，要求相关系数 R2≥0.990（具体以试剂盒性能指标为准）。

2. 质控程序：同步测定高、中、低三个水平的质控品，检测完成后查看质控结果是否在规定靶值范围内；若超出范围，需排查试剂、仪器、操作等环节问题，解决后重新进行校准与质控。

五、样本检测

1. 按仪器参数设定的试剂 / 样本比例，依次向反应杯加入对应试剂和待检测样本，确保加样顺序正确（如先加 R1 和样本，孵育后再加 R2）。

2. 按规定的孵育温度和时间完成反应，避免反应不充分或过度反应。

3. 反应结束后，仪器自动读取各样本的吸光度值 / 吸光度变化率，记录原始数据。

六、结果计算与记录

1. 依据绘制好的标准曲线，结合样本的吸光度相关值，自动或手动计算样本中被测物的浓度 / 活性（如公式：被测物浓度 =（样本吸光度值 - 空白吸光度值）× 校准品浓度 /（校准品吸光度值 - 空白吸光度值））。

2. 记录检测结果，同时标注校准曲线相关系数、质控结果等关键信息，便于后续结果追溯与验证。

注意事项：

生化试剂盒的测定原理是什么？

生化试剂盒的测定核心原理是利用目标物质与试剂的特异性生化反应，将目标物质的浓度或酶活性转化为可定量的物理信号（如吸光度、荧光强度、电极电位等），再通过标准曲线计算样本中目标物质的含量或活性。
不同类型的生化试剂盒，其测定原理因检测对象和方法学差异而不同，具体可分为以下几大类：
酶活性检测类原理
这类试剂盒是最常见的生化试剂盒，核心是通过酶的催化特性，监测底物消耗或产物生成的速率 / 总量来表征酶活性，分为终点法和速率法两种核心方式。
终点法：酶催化底物反应至完全（达到平衡），产物的总量与酶活性成正比。通过检测产物的特征信号定量，例如丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒，ALT 催化丙氨酸与 α- 酮戊二酸生成丙酮酸，丙酮酸与 2,4 - 二硝基苯肼结合生成有色苯腙化合物，在 505 nm 波长下测吸光度，吸光度值与 ALT 活性正相关。
速率法：实时监测酶促反应过程中底物减少或产物生成的速率，该速率直接与酶活性成正比，无需等待反应终点，结果更精准。例如乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将 NAD?还原为 NADH，NADH 在 340 nm 有特征吸收峰，通过连续测定该波长下吸光度的上升速率，即可计算 LDH 活性。
代谢物检测类原理
用于检测葡萄糖、尿素、总蛋白等代谢物含量，核心是通过特异性显色反应或酶联反应，将代谢物浓度转化为吸光度信号，常用比色法和荧光法。
比色法：代谢物与试剂发生显色反应，产物吸光度与浓度成正比。例如：
葡萄糖（己糖激酶法）：己糖激酶催化葡萄糖与 ATP 生成葡萄糖 - 6 - 磷酸，后者在葡萄糖 - 6 - 磷酸脱氢酶作用下生成 NADPH，通过 340 nm 吸光度定量葡萄糖；
总蛋白（双缩脲法）：碱性条件下蛋白质肽键与 Cu2?结合，生成紫红色双缩脲络合物，540 nm 吸光度与蛋白浓度正相关。
荧光法：代谢物与荧光探针反应生成荧光物质，荧光强度与浓度成正比，灵敏度高于比色法，适合低浓度样本。例如谷胱甘肽（GSH）试剂盒，GSH 与邻苯二甲醛在酸性条件下生成强荧光衍生物，通过荧光分光光度计检测荧光强度定量。
离子检测类原理
用于检测钾、钠、钙等电解质浓度，核心是利用离子与特异性试剂的结合反应，引发吸光度或电极电位变化。
比色法示例：钙离子试剂盒（偶氮砷 Ⅲ 法），酸性条件下钙离子与偶氮砷 Ⅲ 结合生成蓝色络合物，660 nm 吸光度与钙离子浓度成正比；
离子选择电极法：电极膜对特定离子具有选择性响应，离子浓度变化会导致电极电位改变，电位值与离子浓度的对数呈线性关系，适合快速检测血清、尿液中的电解质。
氧化应激相关检测类原理
用于检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）等指标，原理结合氧化还原反应、酶催化与显色反应。
丙二醛（MDA）试剂盒（硫代巴比妥酸法）：MDA 是脂质过氧化产物，在酸性、高温条件下与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成粉红色 MDA-TBA 加合物，532 nm 吸光度与 MDA 浓度正相关；
SOD 试剂盒（黄嘌呤氧化酶法）：SOD 能抑制黄嘌呤氧化酶催化的超氧阴离子生成，超氧阴离子可与显色剂反应生成有色物质，通过检测显色反应的抑制程度，间接计算 SOD 活性。

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