牛Agouti相关蛋白(AgRP)酶联免疫试剂盒

注意事项：
1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持*。
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。

牛Agouti相关蛋白(AgRP)酶联免疫试剂盒

试剂准备：
1. 试剂回温：先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入
37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml冻干标准品中，静置15分钟待其*溶解后轻 轻混匀(浓度为1000pg/ml)，然后按照以下浓度：250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.9 pg/ml进行稀 释。复溶过的标准品原液（1000pg/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～ -80℃冰箱，具体如下图。

4. 生物素化抗体工作液：预先计算好试验所需用量，用检测稀释液（SR2）将100倍抗体浓缩液稀释成1倍

应用工作液（稀释前充分混匀），请在30分钟内加入到反应孔中。

5. 酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制，用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶结合物稀释成1 倍应用工作液（稀释前离心），请在30分钟内使用。

6. 洗涤方法：

自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为 300ul/孔,注 与吸出间隔为 30 秒，洗板 5 次。

手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔，静止 30 秒后甩 净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板 5 次。

结果判断：

1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测，请 用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。

2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值

3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中IL-2含量可通过对应OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。

4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。

牛Agouti相关蛋白(AgRP)酶联免疫试剂盒

1. 数据及标准曲线

本图仅供参考

2. 灵敏度：
低可检测人 IL-2 浓度达 2pg/ml，
20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。

3. 特异性：

不与人 IL-2、4、6、8、10 反应，小鼠 IL-2、4、6、8 等反应。

4. 重复性：
板内，板间变异系数<10%。

5. 回收率：
在选取的健康人血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的人 IL-2，计算回收率。

6. 线性稀释：

分别在选取的 4 份健康人血浆和细胞培养上清中加入高浓度人 IL-2，在标准曲线动力学范围内进行稀 释，评估线性。

牛Agouti相关蛋白(AgRP)酶联免疫试剂盒

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