牛脑源性神经因子(BDNF)酶联免疫试剂盒

注意事项：
1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持*。
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。

牛脑源性神经因子(BDNF)酶联免疫试剂盒

试剂准备：
1. 试剂回温：先在实验前 30 min 将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入
37℃温浴直到结晶全部溶解。
2. 配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成 1 倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。
3. 标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1ml冻干标准品中，静置15分钟待其*溶解后轻 轻混匀(浓度为1000pg/ml)，然后按照以下浓度：250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.9 pg/ml进行稀 释。复溶过的标准品原液（1000pg/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～ -80℃冰箱，具体如下图。

4. 生物素化抗体工作液：预先计算好试验所需用量，用检测稀释液（SR2）将100倍抗体浓缩液稀释成1倍

应用工作液（稀释前充分混匀），请在30分钟内加入到反应孔中。

5. 酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制，用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶结合物稀释成1 倍应用工作液（稀释前离心），请在30分钟内使用。

6. 洗涤方法：

自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为 300ul/孔,注 与吸出间隔为 30 秒，洗板 5 次。

手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液 300ul/孔，静止 30 秒后甩 净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板 5 次。

结果判断：

1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测，请 用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。

2.计算标准品、样品的平均 OD 值：每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值

3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中IL-2含量可通过对应OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。

4.若标本 OD 值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。

牛脑源性神经因子(BDNF)酶联免疫试剂盒

1. 数据及标准曲线

本图仅供参考

2. 灵敏度：
低可检测人 IL-2 浓度达 2pg/ml，
20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。

3. 特异性：

不与人 IL-2、4、6、8、10 反应，小鼠 IL-2、4、6、8 等反应。

4. 重复性：
板内，板间变异系数<10%。

5. 回收率：
在选取的健康人血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的人 IL-2，计算回收率。

6. 线性稀释：

分别在选取的 4 份健康人血浆和细胞培养上清中加入高浓度人 IL-2，在标准曲线动力学范围内进行稀 释，评估线性。

酶联免疫检测试剂盒是一种常用的免疫学检测方法，被广泛应用于医学、生物科技、农业等领域。然而，要想获得准确的检测结果，在使用过程中需要注意一些细节。本文将详细介绍使用酶联免疫检测试剂盒时需要注意的细节，帮助您更好地理解和应用这种方法。
一、选择适合的试剂盒
首先，选择适合自己需求的试剂盒非常重要。不同的试剂盒适用于不同的检测项目，因此要仔细比较不同产品之间的特点和性能，选择 自己实验需求的试剂盒。同时，还要注意试剂盒的生产日期、保质期等信息，确保使用时不会过期。

二、保证试剂盒的质量
在使用试剂盒前，要仔细检查试剂盒是否完好无损，如有破损或过期等情况应及时更换。此外，还要注意试剂盒的保存方式，按照说明书上的要求进行存储，避免阳光直射、高温、潮湿等环境因素影响试剂盒的质量。
三、做好实验前的准备工作
在使用试剂盒前，要做好充分的实验准备工作。首先，要准备好实验所需的器材和设备，如酶标仪、微孔板、移液器、洗涤液等。同时，还要对实验操作流程进行熟悉和了解，确保实验过程中不会出现操作失误。
四、注意试剂的保存和使用
试剂是进行酶联免疫检测的重要成分，因此要注意试剂的保存和使用。一般来说，试剂应按照说明书上的要求进行存储和使用，避免污染或失效。对于一些需要低温保存的试剂，要将其放在冰箱中保存，使用时再取出。

五、规范操作流程
在使用酶联免疫检测试剂盒时，要按照说明书上的操作流程进行规范操作。一般来说，操作流程包括以下几个步骤：样品处理、加样、孵育、洗涤、显色、比色等。要确保每个步骤都按照要求进行操作，避免出现误差或污染等情况。
六、注意实验安全
在进行酶联免疫检测时，要注意实验安全。一些实验操作可能会涉及到危险物质或微生物等，因此要遵守实验室安全规范，正确使用防护用品和器材。同时，对于一些具有的样品或试剂，要按照相关规定进行操作和处理，避免污染环境和危害人员健康。
七、做好数据处理和分析工作
使用酶联免疫检测试剂盒时，要做好数据处理和分析工作。对于获得的实验数据要进行统计和处理，确保数据的准确性和可靠性。同时，还要对数据进行深入的分析和解释，为实验结果提供科学的依据和结论。
总之，使用酶联免疫检测试剂盒时需要注意很多细节问题。只有做好每个环节的工作才能保证获得准确的检测结果。因此，在使用过程中要认真阅读说明书并按照要求进行操作同时注意安全和数据处理等方面的问题才能更好地发挥酶联免疫检测试剂盒的作用。