牛胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒免费代测，售后无忧

说明书：

需自备物品：

1. 酶标仪（450nm）

2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。

7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

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操作步骤

1.从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。

2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；

3. 待测样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗 板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6. 所有孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 所有孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

选择一款合适的酶标板，是ELISA实验成功的 步，然而很多人却忽略了这一点。大家在做实验时往往只考虑实验本身，却不知道产品往往对实验也有很大影响。合适的选择产品，将有助于实验的成功进行。我们在进行ELISA实验的时候通常考虑以下这些因素：

一：孔底的形状：
现在的厂家均将酶标孔设计成独立的柱状，适当地增大孔与孔之间的距离，使之能独立分开，从而 程度地减少交叉污染。不同种类的酶标板其孔底的形状是不同的。以下是一些常见孔底形状：
平底：底部水平，也叫F底。光透过底部不会发生偏折，可以 程度的透光。应用于因可视性或其他原理需要用到圆底的实验。
圆底：也叫U底，提供 的清洗效果以及混合型能，适合需要测试沉淀物的应用。
C型底：介于平底和圆底之间能够提供好的清洗效果，同时结合了平底的优点。
锥型底：又称V底，适用于精准取样以及储存微量样本，以获得 小容量的回收。
二：酶标板的颜色：
酶标板的颜色有三种：透明、黑色、白色。
绝大多数ELISA都选择透明板作为实验材料。白色和黑色的酶标板一般用于发光检测。黑色的酶标板自身会有光吸收，所以其信号要弱于白色的酶标板。黑色的酶标板一般用于检测较强的光，如荧光检测；相反，白色的酶标板可用于较弱的光检测，常用于一般的化学发光和底物显色（如双荧光素酶报告基因分析）。
三：酶标板的材质：
常见的材质有聚乙烯（polyethylene,PE），聚丙烯 （polypropylene,PP），聚苯乙烯（Polystyrene,PS），聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸酯（Polycarbonate,PC）。ELSIA中应用最广的材料是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯质软板薄，可剪割，价格低廉。缺点是光洁度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相应的背景值也会有所增加。通常要在酶标板表面进行离子接枝处理，在聚合物表面引入醛基、氨基、环氧基等活性官能团，提高基体表面的性能。
四：不同的结合机理：
包被物质与板底表面的有效结合是ELISA中至关重要的一步。因此，在实验开始前应仔细分析待包被物质的结构特点与化学特性，以选择适当的酶标板。一般来说，包被物质与板底有以下几种结合方式：被动吸附、共价结合和亲和捕获。
被动吸附（Passive Adsorption）：被动吸附的机理比较复杂，包被物质与板底之间的结合主要依靠分子间作用力（范德华力）和氢键。在绝大多数ELISA中，包被物质与板底的结合都是依靠被动吸附来完成的。一般来说，中等分子量及大分子量的抗原（或抗体）与板底之间的结合是依靠被动吸附来完成的。在挑选酶标板时通常要考虑板底表面的疏水性/亲水性特征。下表中列出了不同亲水性的板底表面的适用范围及用途：

亲和捕获（Affinity Capture）：亲和捕获建立在标记后的大分子与其相应的受体特异性结合的基础上。标签化的大分子既可以通过化学偶联得到也可以通过基因工程的方法得到。亲和捕获的特点是：
特异性高
可提高测量结果信噪比
比较常见的孔底表面有：链霉亲和素（streptavidin）包被表面；镍螯合物（Nickel Chelate）包被表面以及谷胱甘肽(Glutathione，GSH)包被表面。
链霉亲和素表面：利用链霉亲和素与生物素的高亲和力及特异性实现底板与包被蛋白的结合。
镍螯合物表面：镍螯合物被连接在聚合物表面，可结合具有His（组氨酸）标签的融合蛋白。
谷胱甘肽表面：利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶（GST）之间酶和底物的特异性实现底板与包被蛋白的结合。

免责声明

试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或生物体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担， 本公司概不负责。

严格按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。