实验原理

    ELISA运用了免疫学原理和化学反应显色原理，需要将抗原或抗体预包被在固相载体表面，使后来形成的抗原-抗体-酶 (荧光基团) -底物复合物黏附在载体上，通过检测OD值或发光值，来检测靶蛋白的含量。

实验所需自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

试剂盒组成

操作步骤

1. 准备工作：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟，使试剂盒恢复至室温。同时准备好实验所需的材料和器具。
2. 加样：在酶标板的弟1个孔中加入标准品50μL，然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。
3. 温育：将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。
4. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。
5. 加酶：在每个孔中加入酶标物100μL。
6. 温育：再次将酶标板密封，在37℃下温育30分钟。
7. 洗涤：用洗涤液清洗酶标板，共洗涤5次。每次洗涤后，用吸水纸轻轻吸干孔内液体。
8. 加底物：在每个孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。
9. 终止反应：在每个孔中加入终止液50μL。
10. 检测：用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度（OD值）。

小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA检测试剂盒

结果分析

根据标准品和样本的OD值，绘制标准曲线，从而计算出样本中角蛋白1（KRT1）的浓度。具体分析方法可参考试剂盒说明书或相关文献。

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注意事项

1. 在操作过程中，应保持酶标板的干燥，避免水分进入孔内。
2. 加样时需确保加样准确、无气泡产生。
3. 温育和洗涤过程中需严格控制时间和温度，确保实验结果的准确性。
4. 在使用酶标仪读取OD值时，需确保波长设置正确，避免误差产生。
5. 在整个实验过程中，需保持操作环境的清洁和整洁，避免交叉污染。

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。