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产地 | 上海 |
保存条件 | 2-8℃ |
品牌 | DUMABIO |
货号 | DM-P5444 |
用途 | 科研与实验 |
检测方法 | 吸附测定法 |
保质期 | 6个月 |
适应物种 | 猪 |
检测限 | 鸡 |
数量 | 1000 |
包装规格 | 96T/48T |
标记物 | 电询 |
样本 | 血清,细胞,细胞上清液、体液等 |
应用 | 科研试剂 |
是否进口 | 否 |
实验原理
ELISA运用了免疫学原理和化学反应显色原理,需要将抗原或抗体预包被在固相载体表面,使后来形成的抗原-抗体-酶 (荧光基团) -底物复合物黏附在载体上,通过检测OD值或发光值,来检测靶蛋白的含量。
实验所需自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
试剂盒组成
名称 |
96 孔配置 |
48 孔配置 |
备注 |
微孔酶标板 |
12 孔×8 条 |
12 孔×4 条 |
无 |
标准品 |
0.5mL |
0.5mL |
按说明书进行稀释 |
标准品xishi液 |
6mL |
3mL |
按说明书进行稀释 |
样本xishi液 |
6mL |
3mL |
按说明书进行稀释 |
检测抗体-HRP |
6mL |
3mL |
无 |
20×洗涤缓冲液 |
20mL |
20mL |
按说明书进行稀释 |
底物 A |
6mL |
3mL |
无 |
底物 B |
6mL |
3mL |
无 |
终止液 |
6mL |
3mL |
无 |
封板膜 |
2 张 |
2 张 |
无 |
说明书 |
1 份 |
1 份 |
无 |
自封袋 |
1 个 |
1 个 |
无 |
操作步骤
1. 准备工作:将试剂盒从冰箱中取出,室温放置30分钟,使试剂盒恢复至室温。同时准备好实验所需的材料和器具。
2. 加样:在酶标板的弟1个孔中加入标准品50μL,然后在后续的孔中依次加入待测样本50μL。
3. 温育:将酶标板密封,在37℃下温育30分钟。
4. 洗涤:用洗涤液清洗酶标板,共洗涤5次。每次洗涤后,用吸水纸轻轻吸干孔内液体。
5. 加酶:在每个孔中加入酶标物100μL。
6. 温育:再次将酶标板密封,在37℃下温育30分钟。
7. 洗涤:用洗涤液清洗酶标板,共洗涤5次。每次洗涤后,用吸水纸轻轻吸干孔内液体。
8. 加底物:在每个孔中加入底物A液50μL,再加入底物B液50μL。
9. 终止反应:在每个孔中加入终止液50μL。
10. 检测:用酶标仪在450nm波长下读取各孔的吸光度(OD值)。
推送:牛Dickkopf相关蛋白1 (DKK1)ELISA试剂盒
结果分析
根据标准品和样本的OD值,绘制标准曲线,从而计算出样本中角蛋白1(KRT1)的浓度。具体分析方法可参考试剂盒说明书或相关文献。
注意事项
1. 在操作过程中,应保持酶标板的干燥,避免水分进入孔内。
2. 加样时需确保加样准确、无气泡产生。
3. 温育和洗涤过程中需严格控制时间和温度,确保实验结果的准确性。
4. 在使用酶标仪读取OD值时,需确保波长设置正确,避免误差产生。
5. 在整个实验过程中,需保持操作环境的清洁和整洁,避免交叉污染。
洗板方法
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置 1min 后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板 5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。
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